水蛭素的提取方法[发明专利]

*CN102603890A*

(10)申请公布号 CN 102603890 A(43)申请公布日 2012.07.25

(12)发明专利申请

(21)申请号 201210079781.9(22)申请日 2012.03.23

(71)申请人韶关市颐林泉生物科技有限公司

地址512000 广东省韶关市浈江区北郊黄岗

韶关市科技企业孵化器6号厂房(72)发明人胡立平

(74)专利代理机构韶关市雷门专利事务所

44226

代理人周胜明(51)Int.Cl.

C07K 14/815(2006.01)C07K 1/14(2006.01)

权利要求书 1 页 说明书 2 页权利要求书1页 说明书2页

(54)发明名称

水蛭素的提取方法(57)摘要

本发明涉及一种水蛭素的提取方法，先将水蛭洗净、冰冻、整体捣碎并磨成泥浆状，再加热到60-80℃，并维持2-3分钟，再调整pH值在4-4.4，随即冷却至25-30℃,再加入质量百分比浓度为10﹪的NaCO3，调整pH值6-7，然后加入纯净水先后净提3次，净集全部浸提液，再用管式离心机进行离心分离，再将母液用透析膜透析36h，每12h更换一次透析膜；然后用冷冻干燥法制得水蛭素粗品；最后经冷冻干燥制得水蛭素精品。具有工艺合理、操作方便实用、水蛭素成品的质量稳定性好和收率高的特点。经本发明处理所得水蛭素的收率达到99%以上。CN 102603890 ACN 102603890 A

权 利 要 求 书

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1.一种水蛭素的提取方法，其特征在于工艺步骤是：第一步：将水蛭洗净去除泥土杂质后进行冰冻，经冰冻后对水蛭进行整体捣碎，然后将整体捣碎后的水蛭用工业豆浆机磨成泥浆状；

第二步：将经第一步制得的泥浆状水蛭加热到60-80℃，并维持2-3分钟；第三步：向将经第二步加温后的水蛭浆中加入质量百分比浓度为 10﹪的冰醋酸，调整pH值在4-4.4，随即冷却至25-30℃,再加入质量百分比浓度为10﹪的NaCO3，调整pH值6-7；

第四步：经第三步处理后的水蛭浆用布袋过滤收集母液残渣，然后加入纯净水先后净提3次，净集全部浸提液，再用管式离心机进行离心分离；

第五步：将经第四步得到的母液用透析膜透析36h，每12h更换一次透析膜；第六步：将经第五步得到的透析液用冷冻干燥法制得水蛭素粗品；第七步：将经第六步得到的粗品用适当的蒸馏水进行水溶解，再透析16h，所得溶液经冷冻干燥制得水蛭素精品。

2.如权利要求1所述水蛭素的提取方法，其特征是：在所述第一步中进行捣碎时，连同水蛭体外的冰也一起进行捣碎。

3.如权利要求1所述水蛭素的提取方法，其特征是：在所述第二步中采用夹层加热搅拌锅进行加热，停止加热后放去夹层内的水，待冷却时再在夹层中通过自来水进行冷却。

4.如权利要求1所述水蛭素的提取方法，其特征是：在第三步中的所述pH值调整，是在经第二步加热处理后，调酸的目的是要使水蛭血红蛋白凝固，pH值4时凝固最完全，因此调酸的pH值一定要到位，冷却后调pH值至7,这样中和了酸性，到液体变色并析出澄清的水为止。

5.如权利要求1所述水蛭素的提取方法，其特征是：在第四步中采用管式离心机进行离心分离，将滤液反复进行三次离心分离，收集液体并去除管中的残渣。

6.如权利要求1所述水蛭素的提取方法，其特征是：在第五步中所述透析膜呈带状，径长大于30mm，这样才能一次性透析完全。

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CN 102603890 A

说 明 书水蛭素的提取方法

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技术领域

[0001]

本发明属于水蛭素的制备方法技术领域，涉及一种成品收率达到99%以上的水蛭

素提取方法。

背景技术

[0002] 水蛭素是水蛭体内的一种蛋白质，含65个氨基酸残基和3对二硫键，具有高度特异的抗凝血酶活性，抑制凝血酶结合底物，故有抗凝血作用。[0003] 目前在制备水蛭素时，通常是将水蛭冷却后进行捣碎，而活的水蛭在捣碎时困难很大，因为水蛭身体是软的不易捣碎，而且在加工过程中水蛭不断逃跑，爬得四周都是，十分恶心；也有的是用开水将水蛭煮一下，使其死后再捣碎，但是在过水时水蛭素分泌物从水蛭口腔中流失；通常对泥浆状水蛭用电炉或手工煮，这样既不能工业化，又不能恒温加热；对水蛭液采用离心机离心分离不完全，水蛭素成品收率低，由于现有的水蛭素提取方法存在上述工艺不合理的缺点，因而水蛭素成品的质量稳定性差，收率通常只有80%左右。发明内容

[0004] 为了克服现有技术的上述缺点，本发明提供一种具有工艺合理、操作方便实用、水蛭素成品的质量稳定性好和收率提高到99%以上的水蛭素的提取方法。[0005] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种水蛭素的提取方法，其工艺步骤是：

第一步：将水蛭洗净去除泥土杂质后进行冰冻，经冰冻后对水蛭进行整体捣碎，然后将整体捣碎后的水蛭用工业豆浆机磨成泥浆状；

第二步：将经第一步制得的泥浆状水蛭加热到60-80℃，并维持2-3分钟；第三步：向将经第二步加温后的水蛭浆中加入质量百分比浓度为 10﹪的冰醋酸，调整pH值在4-4.4，随即冷却至25-30℃,再加入质量百分比浓度为10﹪的NaCO3，调整pH值6-7；

第四步：经第三步处理后的水蛭浆用布袋过滤收集母液残渣，然后加入纯净水先后净提3次，净集全部浸提液，再用管式离心机进行离心分离；

第五步：将经第四步得到的母液用透析膜透析36h，每12h更换一次透析膜；第六步：将经第五步得到的透析液用冷冻干燥法制得水蛭素粗品；第七步：将经第六步得到的粗品用适当的蒸馏水进行水溶解，再透析16h，所得溶液经冷冻干燥制得水蛭素精品。

[0006] 在所述第一步中进行捣碎时，连同水蛭体外的冰也一起进行捣碎。[0007] 在所述第二步中采用夹层加热搅拌锅进行加热，停止加热后放去夹层内的水，待冷却时再在夹层中通过自来水进行冷却。

[0008]

在第三步中的所述pH值调整，是在经第二步加热处理后，调酸的目的是要使水蛭

血红蛋白凝固，pH值4时凝固最完全，因此调酸的pH值一定要到位，冷却后调pH值至7,这

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说 明 书

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样中和了酸性，到液体变色并析出澄清的水为止。[0009] 在第四步中采用管式离心机进行离心分离，将滤液反复进行三次离心分离，收集液体并去除管中的残渣。

[0010] 在第五步中所述透析膜呈带状，径长大于30mm，这样才能一次性透析完全。[0011] 本发明的有益效果是：采用冰冻处理使得水蛭素不流失，同时在捣碎时连同水蛭体外的冰也一起进行捣碎，所以没有水蛭素的损失，然后通过工业的豆浆机把它磨成泥浆状；采用夹层的加热搅拌锅进行加热，这样既能工业化操作，又能进行恒温加热，停止加热后放去夹层水，待冷却时再在夹层中通过自来水冷却；在加热后，调酸的目的是要使水蛭素中的血红蛋白凝固，pH值4时凝固最完全，调酸的pH值一步到位，冷却后调pH值至7,这样中和了酸性，到液体变色并析出澄清的水为止；使用管式离心机，将滤液反复三次离心分离，收集液体并去处管中的残渣，提高收率；透析漠呈带状，径长在30mm以上，这样一次性透析完全，透析液采用纯净水使得低分子的物质能完全排出；具有工艺合理、操作方便实用、水蛭素成品的质量稳定性好和收率提高到99%以上的特点。具体实施方式

[0012] 下面结合实施例对本发明进一步说明。[0013] 一种水蛭素的提取方法，其工艺步骤是：第一步：将水蛭洗净去除泥土杂质后进行冰冻，采用冰冻处理使得水蛭素不流失，经冰冻后对水蛭进行整体捣碎，然后将整体捣碎后的水蛭用工业豆浆机磨成泥浆状；在进行捣碎时，连同水蛭体外的冰也一起进行捣碎，所以没有水蛭素的损失。第二步：将经第一步制得的泥浆状水蛭加热到60-80℃，并维持2-3分钟；采用夹层加热搅拌锅进行加热，这样既能工业化操作，又能进行恒温加热，停止加热后放去夹层内的水，待冷却时再在夹层中通过自来水进行冷却。第三步：向将经第二步加温后的水蛭浆中加入质量百分比浓度为 10﹪的冰醋酸，调整pH值在4-4.4，随即冷却至25-30℃,再加入质量百分比浓度为10﹪的NaCO3，调整pH值6-7；调酸的目的是要使水蛭血红蛋白凝固，pH值4时凝固最完全，因此调酸的pH值一定要到位，冷却后调pH值至7,这样中和了酸性，到液体变色并析出澄清的水为止。第四步：经第三步处理后的水蛭浆用布袋过滤收集母液残渣，然后加入纯净水先后净提3次，净集全部浸提液，再用管式离心机进行离心分离；采用管式离心机进行离心分离，将滤液反复进行三次离心分离，收集液体并去除管中的残渣，提高收率。第五步：将经第四步得到的母液用透析膜透析36h，每12h更换一次透析膜；所述透析膜呈带状，径长大于30mm，这样才能一次性透析完全，透析液采用纯净水使得低分子的物质能完全排出。第六步：将经第五步得到的透析液用冷冻干燥法制得水蛭素粗品。第七步：将经第六步得到的粗品用适当的蒸馏水进行水溶解，再透析16h，所得溶液经冷冻干燥制得水蛭素精品。[0014] 本发明具有工艺合理、操作方便实用、水蛭素成品的质量稳定性好和收率高的特点。经本发明处理所得水蛭素的收率达到99%以上。

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