２１０—２１８ 草业 学报 第２ｏ卷第２期 ２Ｏ１１年４月 ＡＣＴＡ ＰＲＡＴＡＣＵＩ ＴＵＲＡＥ ＳＩＮＩＣＡ Ｖｏ１．２０，Ｎｏ．２ 两个高羊茅品种成熟种子再生体系的建立 闫军辉 ，赵智燕 ，何亚丽 （１．上海交通大学农业与生物学院，上海２００２４０；２．上海市南汇区绿化管理所，上海２０１３００） 摘要：以２个高羊茅品种（“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”和“沪坪１号”）的成熟种子为外植体，在ＭＳ培养基上分别添加不同浓度的２ 种植物生长调节剂，探索其愈伤组织的诱导、继代和分化的最佳激素配比及其相互问的影响，以建立简便高效的再 生体系。结果表明，完整高羊茅种子最佳的愈伤诱导培养基为Ｍｓ＋２，４一Ｄ ３ ｍｇ／Ｉ ，诱导率为７１ ；而把成熟种子 进行纵切后得到的半粒种子的较优的愈伤诱导培养基为Ｍｓ＋２，４－Ｄ ２．５ ｍｇ／ｌ ，诱导率占半粒种子外植体的６Ｏ ， 占完整种子（２个半粒种子）外植体的９Ｏ 以上；在最优诱导培养基上产生的愈伤组织的最佳继代培养基为Ｍｓ十 ２，４－Ｄ ３ ｍｇ／Ｌ，其胚性愈伤诱导率为７０ ，而添加６－ＢＡ则抑制２，４－Ｄ对胚性愈伤组织的诱导；不同品种的最优的 分化培养基不同——“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”的最优分化培养基为Ｍｓ＋２，４一Ｄ ｌ ｍｇ／Ｉ ４－６－ＢＡ １ ｍｇ／１ ，而“沪坪１号”的最佳 组合是ＭＳ４－２，４－Ｄ ２ ｍｇ／Ｉ ４－６－ＢＡ １ ｍｇ／Ｉ ，分化率分别达到５Ｏ 和５６ 。生根培养基采用已报道的组合１／２ＭＳ －ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｉ ，生根率达１Ｏ¨４Ｏ 。 关键词：高羊茅；成熟种子；再生体系 中图分类号：￥５４３．０３；Ｑ９４５．３９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４—５７５９（２Ｏ１１）０２ ０２１０～０９ 高羊茅（Ｆｅｓｔｕｃａ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ）是一种重要的多年生冷季型草，综合抗性较强，周年绿色期也相对较长，广泛 种植在气候过渡区和冷季型区的南部＿１］。但是高羊茅在夏季高温高湿条件下易感病，如不及时进行病虫害防治， 会出现植株体死亡，草坪上产生斑秃。因此，进一步改良高羊茅草种特性，提高其耐热性、耐病性等越夏性能，对 于改善坪用或者饲用方面的经济特性有重要的意义。高羊茅属于异花授粉植物，各品种间及个体问基因型各异， 群体的遗传基础相当复杂，这一方面为进一步的选择育种提供了丰富的基因型，另一方面却增大了传统育种的难 度ｌ－】 ］。基因工程技术则为高效地改良高羊茅品种的特性提供了新的途径，它能快捷地将有用基因直接整合到 植物中，从而加快了育种进程，提高育种效率＿３ ］。由于遗传转化发生在单个细胞水平上，再生植株的多少很大程 度上取决于转化细胞再生能力的大小 ］。因此，建立稳定而高效的再生体系是植物细胞水平遗传转化的基础。 从２０世纪８Ｏ年代开始，高羊茅组织培养方面的研究得到很大发展，所使用的受体材料涉及到成熟的种 子 、未成熟的胚ｌ＿】 、幼穗［１“ 和下胚轴ｌｌ ］等。再生体系建立中，未成熟的胚是愈伤组织诱导率最高的外植 体，在转化过程中效率也较高，但是，与成熟的种子作为外植体相比，存在实验设备要求高、耗时、成本高且受季节 限制等缺点口 。而以成熟种子作为外植体，取材方便，周年都可以使甩。已有的研究结果表明，不同品种之间存 在着基因型决定的差异，从而导致不同基因型适宜的再生体系中激素种类和激素浓度不同，几乎存在着一种基因 型对应一种最适培养体系的关系。例如：余桂红等 的研究结果表明，高羊茅“猎狗５号”和“野马２号”品种的 成熟种子在ＭＳ４－２，４一Ｄ １０ ｍｇ／Ｌ的培养基中愈伤组织诱导率最高（分别为５４．８Ｏ 和１２．６４ ），而“新秀”和“颂 歌”品种的出愈率在ＭＳ４－２，４一Ｄ ８ ｍｇ／Ｉ 的培养基中最高（１６．９ｌ 和２５．１４Ｖｏ）。似乎已报道的高羊茅再生体系 的条件并不能直接适用于其他品种。 “沪坪一号”（曾用名“沪青矮”）是上海交通大学培育的一个高羊茅草坪草新品种，于２００９年通过全国草品种 审定委员会的审定。该品种的主要优点是矮生且质地细腻 ，但耐病性有待提高。“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”是从美国引进 的一个普通型品种，综合抗性较强，但株型较高，生长迅速口 ，需频繁修剪，因而需要矮化株型。本研究以各具特 收稿日期：２０１０—０３—０２；改回日期：２０１Ｏ－０７ ２０ 基金项目：上海市农业委员会科技兴农重点攻关项目［沪农科攻字（２００６）第４－５号］和国家科技部“十一五”科技支撑计划（２００６ＢＡＤ０１Ａ１９—４ ６）资助。 作者简介：闫军辉（１９８５），男，河南项城人，在读硕士。Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｕｎｈｕｉｙａｎ＠ｓｊｔｕ．ｅｄｕ．ＣＦＩ ＊通讯作者。Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｅｙａｌｉ＠．ｑｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 第２Ｏ卷第２期 草业学报２Ｏ１１年 色的“沪坪一号”和“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”品种种子为外植体材料，以较小的水平问距在较宽的２，４ Ｄ浓度内筛选适宜愈伤 诱导的浓度，并以来源相同的愈伤组织进行继代和分化培养基的筛选，以避免不同来源愈伤组织内源激素水平的 差异对试验结果带来较大的误差影响，从而优化高羊茅的再生体系，并为改良这２个特定品种进行的遗传转化提 供技术基础。 １材料与方法 １．１ 试验材料 本试验于２００９年３月到１１月进行。以高羊茅的２个品种“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”和“沪坪一号”的成熟种子作为外植 体。经过脱皮消毒后种子的发芽率“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”为９７ ，“沪坪一号”为９２ 。 １．２培养基 基本培养基为ＭＳ培养基 ，其中添加３０ ｇ／ｉ 的蔗糖，７ ｇ／Ｌ的琼脂。ｐＨ值调为５．８，１２ｌ Ｃ下高压灭菌２Ｏ ｎ＇ｘｌｎ。 １．２．１ 诱导培养基 诱导试验ｌ，以完整种子为外植体，在ＭＳ基本培养基中分别添加１，２，…，１１ ｍｇ／Ｉ 的 ２，４ Ｄ作为诱导培养基。 诱导试验２，以纵切后的半粒种子为外植体，在ＭＳ基本培养基中分别添加２．５，５．０和７．５ ｍｇ／Ｉ 的２，４一Ｄ 作为诱导培养基。 １．２．２继代培养基继代试验１，在ＭＳ基本培养基中添加各３个不同浓度的２，４一Ｄ和６ ＢＡ两种激素，２，４－Ｄ 的３个浓度为２．０，４．５和９．０ ｒａｇ／１ ，６ ＢＡ的３个浓度为０，１和２ ｍｇ／Ｉ ，共９个处理组合。 继代试验２，由于继代试验１结果表明，６ ＢＡ不利于愈伤组织形成体细胞胚，而２，４－Ｄ影响显著，故在试验２ 中进一步细化和拓宽２，４一Ｄ的浓度水平，即在ＭＳ基本培养基中分别添加０，１，２，……，１３ ｍｇ／Ｌ，共１４个２，４一Ｄ 浓度梯度处理，探索最佳处理组合。 １．２．３分化培养基分化培养基的组成为ＭＳ＋２，４ Ｄ（０，１，２和３ ｍｇ／Ｌ）＋６－ＢＡ（０，１，２和３ ｍｇ／Ｉ ），共１６个 激素处理组合。 １．２．４生根培养基根据已有的报道¨ ，“１／２Ｍｓ＋萘乙酸（ＮＡＡ）０．５ ｍｇ／Ｌ”培养基上高羊茅的分化植株生根 率达１００ ，故本研究也采用这一生根培养基。 １．３试验方法 １．３．１材料消毒采用稍加改进的Ｂａｉ和Ｑｕｌ６ 介绍的方法，对高羊茅成熟种子外植体进行脱皮及消毒。取适 量的高羊茅成熟种子，在５０ 的硫酸溶液中磁力搅拌２０ ｍｉｎ进行脱皮处理，然后大水冲洗除去硫酸。安替福民 溶液（活性氯＞５．２ ）磁力搅拌消毒１５ ｍｉｎ，倒去安替福民溶液，再用７５ 酒精处理１ ｍｉｎ，放在超净工作台上， 无菌水冲洗６～８次后并浸没种子，备用。 １．３．２ 发芽试验 取经过脱皮消毒后的２个品种的成熟种子，放人铺有湿润滤纸的直径９ ｃｍ培养皿中，每皿 １（）（）粒，３个重复，随机完全区组试验设计。播种后培养皿置于组培室４０／￣ｍｏｌ／（ｍ ・ｓ）ＰＡＲ（ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｒａｄｉａｔｉｏｎ，光合有效辐射）１６ ｈ／ｄ和（２５±２）。Ｃ条件下，４周后进行发芽率统计。 １．３．３愈伤组织诱导完整种子作为外植体（诱导试验１）用无菌的镊子从无菌水中取出适量的种子，接种在各 处理的诱导培养基中。每处理重复４次（４个１００ ｍＩ 的三角瓶），每瓶接种２０粒种子，随机完全区组试验设计。 半粒种子外植体（诱导试验２）参照Ｂａｉ和Ｑｕ一 的方法，用无菌的镊子从无菌水中取出适量的种子放在干 净的滤纸上纵切，将纵切后形成的半粒种子（简称为“半粒种子”）接种在各处理的诱导堵养基中，以切面向下接触 培养基。每处理重复４次（４个１００ ｍＬ的三角瓶，下简称“三角瓶”），每重复（瓶）接种２０个半粒种子，随机完全 区组试验设计。 接种后的三角瓶置于组培架上，（２５ｑ－２）℃下暗培养４周后统计愈伤诱导率。 １．３．４愈伤组织继代 采用诱导试验２得到的最优愈伤诱导培养体系诱导“沪坪一号”半粒种子的愈伤组织，以 此愈伤组织为试验材料进行继代培养基的筛选。首先把２０个半粒种子接种到ＭＳ＋２，４－Ｄ ２．５ ｍｇ／Ｌ培养基上， 为继代试验１接种３６瓶（诱导瓶），为继代试验２接种５６瓶（诱导瓶），在（２５±２）Ｃ下暗培养４周。然后，将各诱 Ａ（ ＴＡ ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥ ＳＩＮＩＣＡ（２Ｏ １ １） ＶＯ１．２Ｏ，Ｎｏ．２ 导瓶中得到的愈伤组织分别全部转入盛有各继代培养基的三角瓶（继代瓶）中。２个继代试验都是４次重复，随 机完全区组试验设计。继代培养期间的培养条件为４０ Ｆｍｏｌ／（ＩＴＩ ・ｓ）ＰＡＲ，１６ ｈ／ｄ和（２５±２）℃，培养４周。最 后，为了检测继代培养基上胚性愈伤诱导率，将各继代瓶中继代后的愈伤组织分别全部转入盛有同一种分化培养 基（ＭＳ＋２，４一Ｄ ２ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ １ ｍｇ／Ｉ ）＿］朝的各个三角瓶（分化瓶）中分化。分化期间的光温条件与继代期间的 相同。分化培养１４ ｄ后，根据不定芽分化率来确定各继代处理的胚性愈伤组织诱导率。 １．３．５ 愈伤组织分化 为了保证分化培养基筛选时所用的材料一致性，以高羊茅“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”和“沪坪一号”的 半粒种子为外植体，在诱导试验２和继代试验２结果产生的最佳培养基上进行愈伤诱导和继代，以此相同来源的 继代后愈伤组织为试验材料，进行分化培养基的筛选。首先，在ＭＳ＋２，４－Ｄ ２．５ ｍｇ／Ｌ诱导培养基上，每瓶接种 ２Ｏ个半粒种子，每品种分别接种６４瓶，（２５±２）℃下暗培养４周。然后，把各瓶中产生的愈伤组织分别全部接种 到盛有继代培养基的６４瓶中，以每瓶为单位，将得到的愈伤组织转移到ＭＳ十２，４一Ｄ ３ ｍｇ／Ｌ的继代培养基上，４Ｏ ｇｍｏｌ／（ｍ ｓ）ＰＡＲ １６ ｈ／ｄ和（２５±２）℃，培养４周。最后，将各瓶中继代后的愈伤组织分别接种盛有各分化培 养基的三角瓶中，每处理重复４次，随机完全区组试验设计。分化培养期间的培养条件与继代条件相同。培养 １４ ｄ后出现绿点，３Ｏ ｄ左右逐渐形成无根幼苗（再生苗），统计每瓶中出现分化的愈伤组织数目与每块愈伤组织 上出现的不定芽数。 １．３．６生根和移栽将幼苗转移至生根培养基培养２ｏ～３０ ｄ后，有大量不定根产生，打开瓶盖炼苗３ ｄ后，冲 洗除去培养基，移栽到装有营养土的盆钵中，置于温室内栽培３０ ｄ后，移栽到大田。 １．４数据统计与分析 发芽率一出芽的种子数÷发芽试验总种子数×１００ 愈伤诱导率一愈伤组织块数÷进行愈伤组织诱导的外植体数÷发芽率×１００ 胚性愈伤诱导率一胚性愈伤组织块数÷进行继代的愈伤组织块数×１００ 每愈伤组织平均分化不定芽数：不定芽数÷进行继代的愈伤总块数×１００ 分化率－－－分化出不定芽的愈伤组织块数÷进行分化的愈伤组织块数×１００ 对于上述属于二项分布的试验数据中具有小于３０ 和大于７０ 的百分率（ｐ）资料，根据方差分析的基本要 求，采用了反正弦数据转换［ａｒｃｓｉｎ（ｐ）“ ］［２ 。对于含有０（零）但都小于１的百分数（ｐ）资料，采用（ｐ＋Ｏ．０１）的反 正弦转换［ａｒｃｓｉｎ（ｐ＋０．０１）“ ］。采用转换后数据进行方差分析和平均数的ＬＳＤ（最小显著差数）法多重比较。 最后将各处理的反正弦转换数据的平均数再转换成百分率，便于阅读理解 。 ２结果与分析 ２．１ ２，４－Ｄ浓度对成熟种子诱导愈伤组织的影响 诱导试验１是以“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”和“沪坪一号”成熟的完整种子为外植体，分别在添加了１１个不同２，４－Ｄ浓度 梯度（１，２，…，１１ ｍｇ／Ｉ ）的ＭＳ培养基上进行愈伤组织诱导。对各处理愈伤组织诱导率的方差分析结果表明，不 同２，４一Ｄ浓度间和不同品种之间诱导率存在显著差异，但品种与２，４一Ｄ浓度之问的互作不显著。“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”的 愈伤诱导率平均为８２ ，比“沪坪一号”的平均出愈率显著高出１４ 。对不同２，４一Ｄ浓度处理的愈伤组织诱导率 间进行差异显著性检验结果（图１）表明，随着２，４一Ｄ浓度从３ ｍｇ／Ｌ增加至１１ ｍｇ／Ｌ，出愈率均保持在较高水平， 愈伤诱导率在６４ ～７８ ，彼此间没有显著差异，显著高于ｌ，ｚ ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ的处理。因此，对完整成熟种子的 愈伤诱导适宜又经济的培养基为ＭＳ＋３ ｍｇ／Ｌ ２，４一Ｄ。 诱导试验２是采用“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”和“沪坪一号”２个品种的纵切半粒种子为外植体材料，在３种２，４－Ｄ浓度的 培养基上诱导愈伤组织。方差分析结果表明，不同品种的纵切半粒种子的愈伤组织诱导率间没有显著差异，不同 ２，４－Ｄ浓度处理之间存在显著差异，而品种与２，４一Ｄ浓度间互作效应不显著。对不同２，４一Ｄ浓度处理平均数的 多重比较结果（图２）表明，２．５和５．０ ｍｇ／Ｌ都属于较好的浓度处理，愈伤组织诱导率分别为６Ｏ 和５７ 。 比较完整种子和半粒种子愈伤诱导的结果，似乎纵切的半粒种子的出愈率不如完整种子的出愈率高。但是 半粒种子诱导的愈伤组织长到２～３ ｍｍ的时间是成熟种子的一半，大约１４ ｄ。且如果将纵切的２个半粒种子放 在一起作为一个考察单位，则１粒种子（２个半粒种子）的出愈率达到９Ｏ 以上，高于１粒完整种子的愈伤组织诱 一 一时曲憋 讴 。 一 一ｌＬｌｅ ２一ｌ，一ｄ］ Ｌ ：《一ｌ一兰１ｌ ０ 第２Ｏ卷笫２朗 草业学报２０１１年 导率。采用完整种子耗时较长，不适宜在短时问得到大量愈伤组织。因此，高羊茅种子愈伤组织诱导的最佳体系 是以纵切的半粒种子作为外植体，在Ｍｓ＋２．５ ｍｇ／Ｌ ２，４ Ｄ的培养基上诱导愈伤组织。 ６５ ４５ ３５ ２５ １ ５ ０ ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ ｌ０ １ｌ １ ２ ２ ５ ５ ０ ７ ５ ２．４一Ｄ浓度Ｃｏｎｔｅｎｔ ｆｒａｇ／Ｌ） ２，４－Ｄ浓度Ｃｏｎｔｅｎｔ（ｍｇ／Ｌ） 图１ 高羊茅“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”和“沪坪一号”２个品种成熟种子在 图２ 高羊茅“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”和“沪坪一号”２个品种的纵切半粒 一 麓 一静 铂 ０葛 ０Ｈ一０／ｎ一一 ：一ｄ） ：｝】ｇ８ 一 ＝＝砖 添加不同浓度２，４－Ｄ的ＭＳ培养基中 种子在添加了不同浓度２，４－Ｄ的ＭＳ培养基中 愈伤组织诱导率平均数的比较 如 船 ¨ 愈伤组织诱导率平均数的比较 Ｆｉｇ．２ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｍｅａｎｓ ｏｆ ａｒｃｓｉｎ（Ｐ）“ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｖｅｒａｇｅｄ ｉｎ ｔｗｏ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｏｆ‘Ｈｕｐｉｎｇ １’ Ｆｉｇ．１ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｍｅａｎｓ ｏｆ ａｒｃｓｉｎ（Ｐ） ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｖｅｒａｇｅｄ ｉｎ ｔｗｏ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｏｆ‘Ｈｕｐｉｎｇ １’ ａｎｄ‘Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ’ｉｎ ＭＳ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｎｄ‘Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ’ｉｎ ＭＳ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ２，４－Ｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ２，４－Ｄ 小 ｆ 种问差异和品种 ２．｛ｌ＿Ｉ）浓度的互作效应小 著ＴＩ１ｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｓｌｉｃｅｄ ｓｅｅｄｓ ｏｆ ｔａｌｌ ｒｅｓｃｕｅ；Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｌｗｅｅｎ ｃｕｈｉｗｔｒｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ａｎｄ ２，４ Ｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ２．２ ２，４一Ｄ和６一ＢＡ对胚性愈伤组织诱导的影响 对继代试验１胚性愈伤组织诱导率的方差分析结果表明，不同胚性愈伤出愈率在不同２，４一Ｄ浓度间、不同 ６ ＢＡ浓度问差异显著，且两者的 作效应显著，因此需要埘两因素不同水平组合平均数作多重比较。对９个不 同处理组合胚性愈伤组织的诱导率的多重比较结果（图３）表明，无论在哪种２，４－Ｉ）浓度（２．０，４．５和９．０ ｍｇ／Ｌ） 下，胚性愈伤组织诱导率均随６－ＢＡ浓度的升高而 著降低，当６－ＢＡ浓度为２ ｍｇ／Ｉ 时，胚性愈伤组织诱导率为 ０。随着２，４ Ｄ浓度的增加，６－ＢＡ对胚性愈伤组织诱导的抑制增强，当２，４ Ｄ浓度达到９ ｒａｇ／Ｌ时，ｌ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ 对胚性愈伤组织诱导的抑制效应与２ ｒａｇ￣ｉ ６－ＢＡ一样（胚性愈伤组织诱导率为０）；６ ＢＡ浓度为０时，３个２，４－Ｄ 浓度的胚性愈伤组织诱导率较高，彼此间没有显著差异。考虑到节约用量以及过高的２，，１一Ｄ浓度培育的愈伤组 织不利于以后的分化，还是以ＭＳ＋２ ｍｇ／Ｉ ２，４ Ｉ）为较好和较经济的继代培养基。 对继代试验２结果的方差分析表明，不同２，４ Ｄ浓度处理的胚性愈伤组织诱导率间存在显著差异。进一步 多重比较结果（图４）表明，３ ｍｇ／Ｉ 的胚性愈伤组织诱导率最高，达到７０ 。因此，本试验得出ＭＳ＋３ ｍｇ／Ｌ ２，４ Ｄ为最佳继代培养基。 当继代、试验ｌ以较宽的２，４ Ｄ浓度水平间距（２．５和４．５ ｒａｇ／Ｌ）在较窄的浓度范围（２．５～９．０ ｍｇ／Ｉ ）里筛选 适宜浓度时，得到２．０和４．５ ｍｇ／Ｉ ２，４ Ｄ处理下的胚性愈伤组织诱导率较高，为５Ｏ 。当进一步以较小的水平 间距（１ ｍｇ／Ｉ ）在较宽的浓度范围（０～１３ ｍｇ／Ｉ ）里筛选适宜浓度（继代试验２）时，得到３ ｍｇ／１ ２，４一Ｄ处理下的 胚性愈伤组织诱导率最高，为７０ ，界于粗筛（继代试验１）的适宜浓度之问。综合２个继代试验结果可以看到 ＭＳ＋３ ｍｇ／Ｉ ２，４一Ｄ是高羊茅诱导胚性愈伤组织的最佳处理。 ２．３ 不同２．４一Ｄ和６－ＢＡ组合对愈伤组织分化率和每块愈伤组织平均不定芽数的影响 对分化试验愈伤组织分化率和每愈伤组织平均不定芽数的方差分析结果均表明，品种、２，４一Ｄ浓度和６－ＢＡ 浓度三因素的 级互作关系显著，因此，应主要对三因素不同水平组合的平均数问进行多重比较。多重比较结果 ＾ ２１４ 咚 麓 一料印蠼 铂 ＿Ｉ ｌＪ。一 。； 岛一砷ｊ＿【ｒＢ ｕ—ＩＩｏ∞０Ｊ（ 吕回 ＡＣＴＡ ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥ ＳＩＮＩＣＡ（２０１ １） Ｏ ５ ０ ５ Ｏ ５ ０ ５ Ｏ ５ Ｏ ５ ４ ４ ３ ３ ２ ２ ｌ ｌ ＾ 毒毒赔籁艇 ＾Ｕ／０一一 一ｄ）ＩＩＩｓＱ 《一 Ｖｏ１．２０，Ｎｏ．２ 一 一【’ｌｌ—ｄ）口Ｉｓ。 一 表明，“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”继代过的愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ １ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ １ ｍｇ／Ｌ培养基上的分化率最高，达到５Ｏ （图５，６），在该培养基上“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”的每愈伤组织平均不定芽分化数为第２，但与最优培养基ＭＳ＋２，４一Ｄ ２ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ １ ｍｇ／Ｌ上的相比差异不显著。因此，对于“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”而言最佳的分化培养基就是ＭＳ＋２，４一Ｄ １ ｍｇ／Ｌ＋６一ＢＡ １ ｍｇ／Ｌ；对于“沪坪一号”品种而言，最佳组合为ＭＳ＋２，４－Ｄ ２ ｍｇ／Ｌ＋６一ＢＡ １ ｍｇ／Ｌ，此时分化率 达到５６ ，平均每块愈伤上面能够产生的不定芽数最多，为５．５个不定芽。在“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”分化率最高的培养基 处理上，“沪坪一号”的分化率却只有２０ ，同样在适宜“沪坪一号”分化的最佳培养基上，“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”分化率却 显著较低，为２０ 。每愈伤组织上平均分化不定芽数在２个品种与培养基问的互作关系上也表现出同样的趋势。 ｌ【 拿毒糍 麓 一褂印 铤 ｇ陶 。 对 ０一 ｕ。 葛～ 。一一对。ｕ～ＩＩ 。 一 磐骧籁嘏一ｏ／０ｖ （ｄｖ蛊 。 一 一 一一 一ｄ）口Ｉｓ。ＪＶ一 印 如 ∞ 如 加 ２．Ｏ ４．５ ９．０ ０ ０ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ ｌＯ ｌ１ １２ ｌ３ １４ ２，４一Ｄ浓度Ｃｏｎｔｅｎｔ（ｎｌｇ／Ｌ） 图３“沪坪一号”纵切半粒种子在“ＭＳ＋２。４－Ｄ ２．５ ｍｇ／Ｌ” 培养基上诱导的愈伤组织转入各继代 ２，４一Ｄ浓度Ｃｏｎｔｅｎｔ（ｍｇ／Ｌ） 图４“沪坪一号”纵切半粒种子得到的愈伤组织在添加 不同浓度２，４－Ｄ的ＭＳ培养基中继代的 胚性愈伤组织出愈率 Ｆｉｇ．４ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｍｅａｎｓ ｏｆ ａｒｃｓｉｎ（Ｐ Ｊ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ 培养基上的胚性愈伤诱导率 Ｆｉｇ．３ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｍｅａｎｓ ｏｆ ａｒｃｓｉｎ（Ｐ） ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ（Ｐ）ｉｎ ＭＳ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ２，４－Ｄ ａｎｄ ６－ＢＡ ｆｏｒ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｆｒｏｍ ｓｌｉｃｅｄ ｓｅｅｄｓ ｏｆ‘Ｈｕｐｉｎｇ １’ｏｎ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ（Ｐ）ｉｎ ＭＳ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃ０ｎｃｅｎｔｒａｔｉ０ｎｓ ｏｆ ２．４－Ｄ ｆｏｒ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｓｌｉｃｅｄ ｍａｔｕｒｅ ｓｅｅｄｓ ｏｆ‘Ｈｕｐｉｎｇ １’ “ＭＳ十２．４－Ｄ ２．５ ｍｇ／Ｌ”ｍｅｄｉｕｍ １．２ ｌ Ｏ １．２ １．０ ０．８ ０．６ ０．８ ０ ６ ０．４ ０．４ ０．２ Ｏ．２ Ｏ ０ １ ２ Ｏ Ｏ １ ２ ３ ６－ＢＡ浓度Ｃｏｎｔｅｎｔ（ｍｇ／Ｌ） ６－ＢＡ浓度Ｃｏｎｔｅｎｔ（ｍｇ／Ｌ） 图５ 在添加不同浓度２，４一Ｄ和６－ＢＡ的ＭＳ培养基中“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”（Ａ）和“沪坪一号”（Ｂ）继代过的愈伤组织分化率 Ｆｉｇ．５ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｍｅａｎｓ ｏｆ ａｒｃｓｉｎ（Ｐ）“ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ（Ｐ）ｏｆ‘Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ’（Ａ）ａｎｄ‘Ｈｕｐｉｎｇ ｌ’（Ｂ） ｉｎ ＭＳ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ２。４－Ｄ ａｎｄ ６－ＢＡ ３讨论和结论 ３．１诱导培养基与种子外植体 在植物的愈伤诱导阶段，２，４ Ｄ的存在起着至关重要的作用。在诱导培养基中添加激动素（ＫＴ） ］、水解酪 ＡＣＴＡ ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥ ＳＩＮＩＣＡ（２Ｏｌ１） 异 。这将影响诱导率和再生率，也就为建立普适的再生体系增加了难度 ６］。一些报道反映不同基因型适宜的 愈伤诱导植物生长调节剂有互作关系 ，但本研究结果表明，无论是完整成熟种子做外植体还是纵切后的半粒 种子，株高与抗性等性状上２个表现型截然不同的基因型（“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”和“沪坪一号”）的愈伤诱导对２，４一Ｄ浓度 的响应一致。因此，对特定基因型最佳再生体系的建立，对于其他基因型的再生体系建立工作也具有一定的指导 意义。 ３．２继代培养基 对愈伤组织进行继代培养的目的，除了要将愈伤组织扩繁外，还在于将非胚性愈伤转为胚性愈伤组织。高丽 美等口 在高羊茅成熟种子再生体系建立的继代培养基中添加了６－ＢＡ，能提高愈伤组织再分化的能力。Ｂａｉ和 Ｑｕ ３］对高羊茅“Ｃｏｒｏｎａｄｏ”品种的成熟种子再生体系研究表明，在继代培养基中添加适当浓度的ＢＡＰ能够提高 愈伤的再生率（添加０．１ ｍｇ／Ｉ 的ＢＡＰ再生率为７１．６ ，而不加ＢＡＰ时，再生率为３８．６ ）。而本研究结果表明 在继代培养基（ＭＳ＋２，４－Ｄ ２～９ ｍｇ／Ｉ ）中添加６－ＢＡ抑制“沪坪一号”胚性愈伤组织的形成，当６一ＢＡ达到２ ｍｇ／Ｌ时，胚性愈伤率为０，而６－ＢＡ为０ ｍｇ／Ｌ和２，４一Ｄ为２ ｍｇ／Ｌ的处理组合较好，胚性愈伤组织诱导率达到 ５０ ，这表明对于高羊茅“沪坪一号”的半粒种子，继代阶段不添加６－ＢＡ有利于胚性愈伤组织的生成。 Ｚｈａｎｇ等口叫认为２，４一Ｄ的存在有助于高羊茅的愈伤诱导和根的形成，但是在愈伤诱导之后，有必要适当降 低２，４一Ｄ的浓度，提高ＫＴ浓度，这样有利于体细胞胚的形成及分化。Ｂａｉ和Ｑｕｌ１列在分析影响高羊茅再生体系 建立的因素时，对于完整的成熟种子，诱导培养基中添加９ ｍｇ／Ｌ的２，４－Ｄ，在继代培养基中使用的２，４一Ｄ浓度是 ２ ｍｇ／Ｌ。高丽美等ｎ 使用高羊茅成熟的种子，将诱导培养基中Ｍｓ＋２，４－Ｄ ９ ｍｇ／Ｌ的浓度减少至继代时的１ ｍｇ／Ｌ，并且加入了０．５ ｍｇ／Ｉ 的６－ＢＡ和１．２５ ｍｇ／Ｌ的ＣｕＳＯ 。本研究结果表明，以ＭＳ为基础培养基中适宜诱 导和继代培养基中２，４一Ｄ浓度没有太大的差异，分别为２．５和３．０ ｍｇ／Ｌ，且浓度较低。造成这方面差异的原因 仍然与各试验采用的基因型与试验设计的２，４一Ｄ浓度水平的不同有关。 Ｚｈａｎｇ等口。 指出，在继代阶段培养基中添加５ ｍｇ／Ｌ的２，４一Ｄ没有体细胞胚的发生，但是，加入采用２ ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ和０．２ ｍｇ／Ｌ ＫＴ的激素配合，能产生较高的体细胞胚。王友生等 阳也发现ＫＴ对胚性愈伤组织的诱导有 重要作用，ＫＴ的作用值得进一步研究。还有些学者认为继代培养基中加入水解酪蛋白 和ＡＢＡ｜２ 等有利于 胚性愈伤组织的诱导。余桂红等 将高羊茅成熟种子诱导得到的愈伤组织转移到继代基本培养基（Ｍｓ＋２，４一Ｄ ５ ｍｇ／Ｌ）上，用水晶洋菜代替琼脂作为凝固剂，发现有助于高羊茅无胚性愈伤组织向胚性愈伤组织转化。采用 ＭＳ以外的基础培养基，添加不同的植物生长调节剂，是否可以进一步提高本研究中两材料的胚性愈伤诱导率， 以及对其他基因型是否具有普遍效应，也值得进～步的探索。 ３．３分化培养基 愈伤组织再生能力很大程度上取决于体细胞胚的分化情况，２，４一Ｄ浓度的升高有利于愈伤的生长速度，但是 却减少成为体细胞胚的可能性口 。Ｂａｉ和Ｑｕ 一在对高羊茅“Ｃｏｒｏｎａｄｏ”品种完整种子诱导愈伤的再生体系中， ＭＳ＋２．５ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ的分化率达到３３．１％，而在以半粒种子诱导愈伤的再生体系中以５ ｍｇ／Ｌ ２，４一Ｄ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ培养条件下的分化率为５１．９ 。此后，Ｚｈａｎｇ等 。。将完整的高羊茅“Ｃｏｒｏｎａｄｏ”品种种子进行愈伤诱 导（ＭＭＳ，改良的ＭＳ＋２，４一Ｄ ５．０ ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．０５ ｍｇ／Ｉ ），继代（ＭＭＳ＋２，４一Ｄ ４．５ ｍｇ／Ｌ十ＫＴ ０．２ ｍｇ／Ｌ），体 细胞胚诱导（ＭＭＳ＋２，４～Ｄ ２。０ ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．２ ｍｇ／Ｌ）及再分化（ＭＳＨ改良的ＳＨ＋ＫＴ ２ ｍｇ／Ｌ），最终得到 ９４．３％的分化率。可见，同一基因型在不同的再生体系中再生效率是相差悬殊的。本研究首次报道在分化阶段 基因型与２，４一Ｄ和６－ＢＡ浓度间存在显著的互作关系，即不同的基因型在不同的２，４～Ｄ和６－ＢＡ浓度水平组合上 的愈伤组织分化率不同，“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”为Ｍｓ＋２，４一Ｄ １ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ １ ｍｇ／Ｉ ，而“沪坪一号”分化最优组合是ＭＳ 十２，４一Ｄ ２ ｍｇ／Ｌ＋６ ＢＡ １ ｍｇ／Ｉ ，得到的最后分化率分别为５０ 和５６ 。 影响愈伤组织分化阶段的因素还有很多。在培养基中，Ｃｕ 浓度的提高，能够显著改善禾本科植物愈伤组 织的再生及胚性ｌ３。’。 ；适量ＴＤＺ的添加，能够提高高羊茅成熟种子愈伤组织再生率ｒ１。 ；提高蔗糖 ］及琼脂的 浓度＿１ ，对于高羊茅再生体系中再生率的提高也有重要作用。何勇等 。 利用高羊茅（品种“王朝”）的成熟种子 作为外植体，放在诱导培养基Ｎ６＋１８ ｍｇ／Ｌ ２，４一Ｄ中，诱导率达到９５．６ ，且分化率为１００ （分化培养基与诱 第２Ｏ卷第２期 草业学报２Ｏ１１年 ２１７ 导培养基的区别是没有添加任何植物生长调节剂）。本研究所采用的再生体系和得到的的分化率与Ｂａｉ和 Ｑｕ 的研究结果相当，与１００ 的分化率相比还有提升空间。可进一步采用其他基础培养基，添加２，４一Ｄ和６一 ＢＡ及其以外的生长调节物质等方面加以进一步的探索。另外在分化阶段，对６ ＢＡ的灭菌和加入方法的不同， 可能会导致不同文献报道的最佳用量有差异。 ３．４ 结论 本研究以形态和抗性差异较大的２个品种为研究材料，确保每次试验采用的组织材料来源一致，以常见的２ 种植物生长调节剂浓度为培养基组分处理，发现在愈伤组织诱导与继代培养阶段高羊茅品种与“２，４一Ｄ”浓度间的 互作效应不显著，预示着本研究得到的愈伤诱导的适宜培养基处理对不同品种的愈伤诱导具有共性和参考应用 价值。以纵切的半粒种子作为外植体，在Ｍｓ＋２，４－Ｄ ２．５ ｍｇ／Ｌ培养基上诱导愈伤组织，其愈伤诱导率最高，达 ６０ 。在ＭＳ十２，４一Ｄ ３ ｍｇ／Ｉ 培养基上继代，胚性愈伤诱导率最高，达７０ 。但是至分化阶段，品种与植物生长 调节剂浓度问的互作显著，表明不同的品种愈伤组织进行不定芽的诱导需要探索各自适宜的植物生长调节剂浓 度。本研究中“Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”品种的胚性愈伤组织在“ＭＳ＋２，４一Ｄ １ ｍｇ／Ｌ＋６ ＢＡ １ ｍｇ／Ｉ ”上分化率最高，达５０ ； 而“沪坪一号”品种胚性愈伤组织在“Ｍｓ＋２，４一Ｄ ２ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ １ ｍｇ／Ｌ”培养基上分化，不定芽分化率最高，达 ６０ 参考文献： ［１］Ｍｅｙｅｒ Ｗ Ａ，Ｗａｔｋｉｎｓ Ｅ．Ｃｏｏｌ—ｓｅａｓｏｎ ｇｒａｓｓｅｓ：Ｔａｌｌ ｒｅｓｃｕｅ［Ａ］．Ｉｎ：Ｍｉｃｈａｅｌ Ｄ Ｃ，Ｒｏｎｎｙ Ｒ Ｄ．Ｔｕｒｆｇｒａｓｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， ａｎｄ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ［Ｍ］．Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ，２００３：１０７—１２８． ［２］Ｋａｓｐｅｒｂａｕｅｒ Ｍ Ｊ．Ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ［Ａ￣．Ｉｎ：Ｋａｓｐｅｒｂａｕｅｒ Ｍ Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｔａｌｌ Ｆｅｓｃｕｅ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ［Ｍ］．Ｆｔｏｒｉ— ｄａ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｒｕｂｂｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９０：５９—７９． ｚ Ｙ，Ｇｅ Ｙ Ｘ．Ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｒａｇｅ ａｎｄ ｔｕｒｆ ｇｒａｓｓｅｓ［Ｊ］．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｄｅｖｅｌｏｐ— ［３］ Ｗａｎｇ ｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｐｌａｎｔ，２００６，４２：１－１８． ［４］ Ｄｏｎｇ Ｓ，Ｑｕ Ｒ．Ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ ｗｉｔｈ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｒｎｅｆａｃｉｅｎｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，１６８： １４５３一ｌ４５８． Ｚ Ｙ，Ｇｅ Ｙ Ｘ．Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ（Ｆｅｓｔｕｃａ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ）［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｉｓ］ Ｗａｎｇ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００５，１ ６２（１）：１０３—１１３． Ｙ，Ｑｕ Ｒ．Ａｎ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｎ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ２５ ｔｕｒｆ ｔｙｐｅ ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ（Ｆｅｓｔｕｃａ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ ［６］ ＢａｉＳｃｈｒｅｂ．）ｃｕｈｉｖａｒｓ［Ｊ］．Ｇｒａｓｓ ａｎｄ Ｆｏｒａｇｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，％００，５５：３２６—３３０． ｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ ａｎｄ ｒｅｄ ｆｅｓｃｕｅ ｐｌａｎｔｓ ｂｙ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ ｏｆ ｍａｔｕｒｅ Ｅ７］ Ｃｈｏ Ｍ Ｊ，Ｈａ Ｃ Ｄ，Ｌｅｍａｕｘ Ｐ Ｇ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｓｅｅｄ ｄｅｒｉｖｅｄ ｈｉｇｈｌｙ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０００，１９：１０８４—１０８９． ［８］ Ｂｒａｄｌｅｙ Ｄ Ｅ，Ｂａｉ Ｙ，Ｔａｌｌｕｒｙ Ｓ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｓｃａｎｎｎｉｎｇ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｐｅｒｅｎｎｉａｌ ｒｙｅｇｒａｓｓ ａｎｄ ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅＥＪ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｕｒｆｇｒａｓｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００ｌ，９：１４６ １５１． 郎春秀，吴关庭，胡张华，等．高羊茅成熟种子组织培养的影响因素研究Ｉ．多种因素对愈伤组织诱导的影响［Ｊ］．浙江农业 学报，２００５，１７（４）：１８２—１８６． ａｎｇ Ｂ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｈｉｇｈｌｙ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｌｌ ｒｅｓｃｕｅ（Ｆｅｓｔｕｃａ ［１０］ Ｚｈａｎｇ Ｗ Ｊ，Ｄｏｎｇ Ｊ Ｉ ，Ｌｉａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ ｓｃｈｒｅｂ．）ｆｒｏｍ ｍａｔｕｒｅ ｓｅｅｄ ｄｅｒｉｖｅｄ ｃａｌｌｉ［Ｊ］．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ－Ｐｌａｎｔ，２００６，４２：１１４— １８． Ｅ１１］ 高丽美，徐子勤，张永彦，等．高羊茅组织培养再生体系及ＧＵＳ基 瞬间表达研究［Ｊ］．西北植物学报，２００１，２５（１）： ４０ ４５． ［１２］ 何阳鹏，于海涛．不同种胚及激素处理对高羊茅愈伤组织诱导的影响［Ｊ］．安徽农业科学，２００３，３１（３）：３７卜３７４． ［１３］ Ｂａｉ Ｙ，Ｑｕ Ｒ．Ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｍａｔｕｒｅ ｓｅｅｄｓ ａｎｄ ｉｍｍａｔｕｒｅ ｅｍｂｒｙｏｓ ｉｎ ｔｕｒｆ－ｔｙｐｅ ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅＥＪ］． Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，２００１，１２Ｏ：２３９ ２４２． ［１４］ Ｅｉｚｅｎｇａ Ｇ Ｃ，Ｄａｈｌｅｅｎ Ｉ Ｓ．Ｃａｌｌｕｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔｓ ｆｒｏｍ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｅｅｓ ｏｆ ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ （Ｆｅｓｔｕｃａ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ Ｓｃｈｒｅｂ．）［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ，Ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ，１９９０，２２：７－１５． 【二Ｉ ２１８ 口 刀 幻 ＡＣＴＡ ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥ ＳＩＮＩＣＡ（２Ｏ １ １） Ｖｏｌ＿２Ｏ，Ｎｏ．２ ［１５］ 赵智燕，潘俊松，何亚丽，等 两种高羊茅无性系的营养器官组织培养及再生体系的建立［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（５）：１６８—１７５． Ｅ１６］ 支大英，韩晓光，赵军胜，等 ８种基因型的高羊茅的组织培养与植株再生ＥＪ］．山东大学学报（理学版），２００４，３９（４）：１ｏ９—１１４． 余桂红，马鸿翔，余建明，等．草坪型高羊茅成熟种子胚性愈伤组织诱导及植株再生ＥＪ］．江苏农业学报，２００４，２０（１）： ３８－４３． 郭金芳，何亚丽．在人工胁迫与上海自然条件下高羊茅草坪草品种和种质资源的特性评价［Ｊ］．上海交通大学学报（农业科 学版），２００８，２６（３）：１８８ １９４． Ｍｅｙｅｒ Ｗ Ａ，Ｓｔａｐｐ Ｒ，Ｈｉｇｎｉｇｈｔ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ“ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅＥＪ］．Ｃｒｏｐ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１，４１：９１８—９１９，６６． Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ Ｔ，Ｓｋｏｏｇ Ｆ．Ａ ｒｅｖｉｓｅｄ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｂｉｏａｓｓａｙｓ ｗｉｔｈ ｔｏｂａｃｃｏ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， １９６２，１５：４７３—４９７． 盖均镒．试验统计方法［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９９９：１２５ ｌ２７． 何勇，田志红，郑思琏．高羊茅成熟胚离体培养及高频植株再生［Ｊ］．草业科学，２００５，２２（６）：２３—２９． Ａｓｈｏｋ Ｃ，Ｑｕ Ｒ．Ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｒｆ—ｔｙｐｅ ｂｅｒｍｕｄａｇｒａｓｓ：Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ６－ｂｅｎｚｙｌａｄｅｎｉｎｅ ｉｎ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ，Ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ，２０００，６０：１１３—１２０． Ｗａｎｇ Ｚ Ｙ，Ａｎｄｒｅｗ Ｈ，Ｒｏｕｆ Ｍ．Ｆｏｒａｇｅ ａｎｄ ｔｕｒｆｇｒａｓｓ ｂｊｏｔｅｃｈ０ｎｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１，２０（６）： ５７３—６１９． Ｐｒｚｅｔａｋｉｅｗｉｃｅ Ａ，Ｏｒｃｚｙｋ Ｗ，Ｎａｄｏｌａｓｋａ—Ｏｒｃｚｙｋ Ａ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｕｘｉｎ ｏｎ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｈｅａｔ，ｂａｒｅｌｙ ａｎｄ ｔｒｉｔｉｅａｌｅ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ，Ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ，２００３，７３：２４５—２５６． ［－２６ 王友生，王瑛，李阳春．三叶草愈伤组织诱导及分化的研究ＥＪ］．草业学报，２００９，１８（２）：２１２—２１５． Ｅ２７ 王维飞，韩烈保，曾会明．高羊茅愈伤组织诱导剂植株再生的研究［Ｊ］．草业科学，２００６，２３（６）：９９—１０３． ［２８ 于小红，朱祯，付志明，等．提高小麦愈伤组织分化频率的因素［Ｊ］．植物生理学报，１９９９，２５：３８８—３９４．［２９ 徐春波，米福贵，王勇，等．影响冰草成熟胚组织培养再生体系频率的因素［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（１）：８Ｏ一８５． ［３ｏ Ｌｙｎｎ Ｓ Ｄ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｂａｒｌｅｙ ｃａｌｌｕｓ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｂｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｐｐｅｒ ｌｅｖｅｌｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ，Ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ，１９９５，４３：２６７—２６９． ａ１．Ｌｏｎｇ—ｔｅｒｍ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃａｌｌｕｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ｈｉｇｈ—ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｐｌａｎｔｌｅｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅ３１］ Ｌｉｕ Ｉ ，Ｆａｎ Ｘ Ｌ，Ｚｈａｎｇ Ｊ Ｗ，ｅｔｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｉｎ Ｚｏｙｓｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ［Ｊ］．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ—Ｐｌａｎｔ，２００９，４５：６７３— ６８０． ［３２］ 吴关庭，胡张华，陈笑芸，等．高羊茅成熟种子组织培养的影响因素研究Ⅱ．不同因素对胚性愈伤组织继代发生的影响［Ｊ］．浙 江农业学报，２００６，１８（５）：３６９—７２． Ｚｅｎｉｔｈ’离体培养植株再生体系优化研究［Ｊ］．草业科学，２００９，２６（４）：１１０—１１６． Ｅ３３］ 李晓红，宗俊勤，佘建明，等．结缕草‘Ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｍａｔｕｒｅ ｓｅｅｄ ｏｆ ｔｗｏ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｏｆ ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ ＹＡＮ Ｊｕｎ—ｈｕｉ ，ＺＨＡｏ Ｚｈｉ—ｙａｎ ，ＨＥ Ｙａ—ｌｉ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊ ｉａｏ Ｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００２４０， Ｃｈｉｎａ：２．Ｌａｎｄｓｃａｐｉｎｇ Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎａｎｈｕｉ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１３００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ａ ｒｅｌｉａｂｌｅ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ（Ｆｅｓｔｕｃａ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ），ｍａｔｕｒｅ ｓｅｅｄｓ ｏｆ‘ＳＨＥＤ’ａｎｄ‘Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ’ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ６－ＢＡ ａｎｄ ２． ４一Ｄ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｉｎｔａｃｔ ｍａｔｕｒｅ ｓｅｅｄ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｗａｓ‘ＭＳ＋２，４一Ｄ ３ ｍｇ／Ｌ’，ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ７１ ，ｗｈｉｌｅ ｔｈａｔ ｆｏｒ ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌｌｙ ｓｌｉｃｅｄ ｓｅｅｄ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｗａｓ‘ＭＳ＋２，４一Ｄ ２．５ ｍｇ／Ｌ’ ｗｉｔｈ ａ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ５６％．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ３ ｒａｇ／Ｌ ２，４－Ｄ，ｇｉｖｉｎｇ ａｎ ａｍ— ｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ７Ｏ ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ６－ＢＡ ｔｏ ｔｈｉｓ ｍｅｄｉｕｍ ａｄｖｅｒｓｅｌｙ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ． Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ‘ＭＳ＋２，４一Ｄ １ ｍｇ／Ｌ＋６一ＢＡ ｌ ｍｇ／Ｌ’ａｎｄ‘ＭＳ＋２， ４－Ｄ ２ ｍｇ／Ｌ＋６一ＢＡ １ ｍｇ／Ｌ’ｗｅｒｅ ５Ｏ （ＣＶ．‘ＳＨＥＤ’）ａｎｄ ５６％（ＣＶ．‘Ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ’）．Ｔｈｅ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｒｏｏｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ‘１／２ ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｉ ’ｇａｖｅ ａ ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｉｏ ｏｆ １ＯＯ ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ；ｍａｔｕｒｅ ｓｅｅｄ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ
