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内蒙古阿鲁科尔沁旗鼠疫疫区小肠结肠炎耶尔森菌调查研究

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中国媒介生物学及控制杂志2015年2月第26卷第1期Chin JVectorBiol&Control,February2015,Vo1.26,No.1 ・・ 41 ・ 论著・ 内蒙古阿鲁科尔沁旗鼠疫疫区小肠结肠炎 耶尔森菌调查研究 董丽 ,于慧霞 ,王立新 ,陈彩玉 ,王化彬 ,王泽民 ,赵海军 ,王敬天 1赤峰市疾病预防控制中心微生物检验科,内蒙古赤峰024000;2阿鲁科尔沁旗疾病预防控制中心 摘要:目的了解赤峰市阿鲁科尔沁旗达乌尔黄鼠鼠疫疫源地内鼠类、家畜家禽携带小肠结肠炎耶尔森菌情况,为 在达乌尔黄鼠鼠疫疫源地内,选择以村庄为中心,向外依次 疾病防治工作和研究鼠疫疫源地提供科学依据。方法为农田、草原的同心圆样地,分别采集鼠类、家畜家禽粪便、舌根、咽拭子及肠道内容物等样品,进行小肠结肠炎耶尔 森菌分离、培养、鉴定、生物血清分型,并用PCR方法进行毒力因子测定。统计学分析采用X 检验。结果2009— 2012年共检验各类样品3837份,检出小肠结肠炎耶尔森菌17株,总检出率为0.44%。2011年检出的16株小肠结肠 炎耶尔森菌中l3株源自猪粪,3株来自鼠肠;1株0:3血清型,生物3型,携带ail、ystA、 c毒力基因的致病性菌株检 自猪粪。结论阿鲁科尔沁旗绍根地区的猪、鼠体内携带小肠结肠炎耶尔森菌,猪是致病性小肠结肠炎耶尔森菌的 重要携带者。进一步调查分析小肠结肠炎耶尔森菌在该地区人和宿主动物间的分布规律十分必要。 关键词:小肠结肠炎耶尔森菌;动物;毒力基因 中图分类号:R516.1 文献标志码:A 文章编号:1003—4692(2015)0l一0041—03 DOh 10.11853 ̄.issn.1003.4692.2015.01.010 Investigation 0f Yersinia enterocolitica in plague epidemic area in Ar Horqin Banner,Inner Mongolia,China D0NG Li ,Yu Hui.xia ,WANG Li—xin ,CHEN Cai.yu ,WANG Hua.bin‘, WANG Ze.min 。ZHAO Hai-jun。.WANG Jing—tian 1 咖 Center for Disease Control and Prevention, ng 024000,/nner Mongolia,China; 2 Ar Horqin Banner Center orf Disease Control and Prevention Supposed by the Major National Science and Technology Pmiects of China(No.2012ZX10004—201) Abstract:0bjective To investigate the status of rodent,livestock,and poultry carrying Yersinia enterocolitica in plague foci maintained by Citellus dauricus in Ar Horqin Banner,Chifeng.Inner Mongolia,China,and to provide scientiifc evidence for prevention and control of the disease and study of the plague foCHS.Methods Villages in the e daur ̄ plague foci were chosen as the sampling centers.and the farmland and grassland in outward concentric circles were sequentially ineluded in the sampling area.Feces,tongue roots,throat swabs。and intestinal contents of rodent。livestock, and poultry were separately collected,and different enterocolitica strains were isolated。cultured。identiifed.and serotyped.PCR analysis was conducted to detect the toxicity genes of enterocolitica.Statistical analysis was performed by chi—square test.Results A total of 3837 samples were collected from 2009 to 2012.Seventeen enterocolitica strains were isolated and the overall detection rate was 0.44%.0f the 16 strains detected in 201 1.13 were from pig feces and 3 from rodent intestines.The pathogenic strain of serotype O:3 and biological type m carrying toxicity genes ail,ystA,and C was isolated from pig feces.Conclusion Pigs and rodents in Shaogen,Ar Horqin Banner,carry enterocolitica.Pigs are the major carrier of pathogenic enterocolitica.Further investigation of the distribution pattern of enterocolitica between human and animal hosts in the area is necessary. Ke.v words:Yersinia enterocolitica;Anitaal;Toxicity gene 小肠结肠炎耶尔森菌病是一种人兽共患的肠道 粒pyv具有同源性,耶尔森菌仅限于初次感染,即动 物只要感染过1次上述3种耶尔森菌的一种,就会对 另外两种致病性耶尔森菌产生一定的抵抗力。阿鲁 科尔沁旗地处松辽平原达乌尔黄鼠(Spermophilus dauricus)鼠疫疫源地,也是布病的流行地区,小肠结 肠炎耶尔森菌在该地区的分布情况尚不清楚。因此, 2009--2012年我们连续4年对活动性鼠疫疫源地绍 传染性疾病。随着研究工作的深入,人们发现感染 小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)不仅能 引起肠道疾患(如腹泻),而且还能引起耶氏肝炎、关 节炎或肺炎等疾病。临床上与布鲁氏菌病(布病)相 鉴别时,在血清学诊断上会出现误诊。有关学者还 认为,由于3种致病性耶尔森菌(鼠疫耶尔森菌、假 结核耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌)携带的毒力质 基金项目:国家科技重大专项课题(2012ZX10004—201) 根地区开展小肠结肠炎耶尔森菌的调查研究工作。 作者简介:董丽,女,副主任技师,主要从事微生物检验工作,Emaih dongli0476@163.com 网络出版I ̄fs'l:2014-12—17 1l:06 网络出版地址:http:/,epub.cnki.net/kns/oldnavi/nCNKIPub.aspx?naviid=59&BaseID=ZMSK&NaviLink= _国媒介生物 控制杂志2o15年2月第26卷第1期Chin JVectorBiol&Control,February 2015,Vo1.26,No.1 1材料与方法 落接种于尿素培养基,25℃培养3 h;将分解尿素的 菌株分别接种于2管半固体培养基,分别在25 和 37 cC培养24 h;取25 培养有动力且37 cC培养无 动力者,做革兰染色;再将革兰染色为阴性的杆菌或 球杆菌行Api20E系统生化鉴定,确定目的菌株。病 原学特征鉴定,血清分型采用玻片法,生物型鉴定采 用小肠结肠炎耶尔森菌生物分型指标…。上述实验 1.1 样地选择及样品采集 阿鲁科尔沁旗绍根镇 是以牧为主的地区,生境属于漫沼草原。镇中心为 居民区,镇周围是耕地,再向外为漫沼草原,符合课 题设计要求的同心圆生态景观。样品采集:以绍根 镇所在地为中心,向外以同心圆方式扩展随机采集 鼠类和家畜家禽样本。由于该地区是鼠疫活动性地 区,所采集的样本均经鼠疫检验为阴性者方可带出 所用试剂、培养基等均由中国疾病预防控制中心传 染病预防控制所提供。 疫区。无菌操作采集宿主动物新鲜粪便、舌根、肠道 内容物和咽拭子标本后,立即放入50 ml或15 m1装 有改良磷酸盐缓冲液的离心管(按1:10混合)并置 于4℃环境冷增菌20 d。 1.2菌株分离培养、鉴定将增菌后的样品,接种 于小肠结肠炎耶尔森菌选择性平板,25℃培养48 h; 选择形态可疑菌落接种于改良克氏双糖琼脂,25℃ 培养24 h;改良克氏双糖斜面:黄/黄、不产H S的菌 1.3毒力基因检测采用常规PCR操作方法,并参 照文献[23设定引物,引物由生工生物工程(上海)股 份有限公司合成,引物序列及退火温度见表1。PCR 反应体系中,模板1 l,premix 10 l,上、下游引物各 0.5 ̄1(20 m01),纯水定容至20 l。扩增参数:94℃ 预变I生5 arin,94 变陛15 s,退火3O s,72 cC延伸30 s, 25个循环,最后72℃延伸10 rain。检测均在中国疾病 预防控制中心传染病预防控制所实验室完成。 表1 6种毒力基因PCR扩增引物序列 Table 1 Sequences of PCR primers used in amplifieation of six toxicity genes of enterocolitica 1.4统计学处理所得数据采用Excel 2003软件计 株为生物lA型,1株为生物3型。17株菌中有16株 携带ystB ̄毒素基因,阳性率为94.12%,1株携带口 (黏附侵袭位点基因)、ysta(耐热性肠毒素基因)和 G 3种毒力基因,阳性率均为5.88%(表3)。 3讨论 算,对不同宿主的小肠结肠炎耶尔森菌的检出率比 较使用SPSS 10.0软件进行x 检验并分析。P<0.05 为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 菌株分离 2009—2012年检测各类样本共 3837份,分离出小肠结肠炎耶尔森菌17株,其中 3.1 阿鲁科尔沁旗境内猪和鼠体携带小肠结肠炎耶 尔森茵2009--2012年,对阿鲁科尔沁旗的调查结 2009年自猪体检出1株,年检出率为0.14%;2011年 自猪体检出13株,年检出率为4.66%,自鼠体检出3 果首次证实阿鲁科尔沁旗境内的宿主动物猪和鼠携 带小肠结肠炎耶尔森菌,而且从猪体检测出0:3血清 型致病性小肠结肠炎耶尔森菌。猪中小肠结肠炎耶 尔森菌的检出率明显高于其他宿主动物。此与我国 其他一些地区的检测结果基本一致口 ,提示该地区 人群与猪接触有感染小肠结肠炎耶尔森菌的可能。 3.2致病性小肠结肠炎耶尔森茵对当地人群构成 株,检出率为0.74%,猪体检出率高于鼠体,且差异 有统计学意义(x =10.75,P=0.ooo)。2010年和 2012年未获得小肠结肠炎耶尔森菌(表2)。 2.2菌株分型及毒力检测 调查所获得的17株小 肠结肠炎耶尔森菌,包括2种血清型,即16株为0:5 血清型,l株为0:3血清型;包括两种生物型,即l6 威胁小肠结肠炎耶尔森菌感染性疾病是一种食源 表3绍根地区动物小肠结肠炎耶尔森菌分型 象,病原学又检不出鼠疫菌,从而使这片历史鼠疫疫 及毒力检测结果 源地更耐人寻味。1990年春季绍根鼠疫监测站检 Table 3 Classification of enterocolitica and detection of toxicity genes in animal hosts in Shaogen 测人员利用鼠疫选择敏感培养基,从大批死鼠(有腹 泻症状)体内分离到一种疑似鼠疫菌,后经内蒙古自 治区鼠疫专家鉴定为非鼠疫菌。本次调查结果显示 l7株小肠结肠炎耶尔森菌有13株来自猪粪,3株检 自鼠肠。鼠肠检出的小肠结肠炎耶尔森菌均为0:5 血清型,生物1A型,携带ystB毒力基因。3株检自鼠 体的小肠结肠炎耶尔森菌有1株是采自距村庄1.5 km 的达乌尔黄鼠。达乌尔黄鼠是黄鼠鼠疫疫源地的主 要宿主动物,本次调查结果表明该鼠疫疫源地的主 性疾病,目前已遍及全世界。我国在20世纪80年代 要宿主动物达乌尔黄鼠携带了O:5血清型,生物1A 中期(1986年)在甘肃省兰州市一个奶牛场曾发生 型的小肠结肠炎耶尔森菌。提示继续调查研究小肠 过一次由致病性小肠结肠炎耶尔森菌(O:3血清型, 结肠炎耶尔森菌在该地区宿主动物间和人间的分布 生物3型)感染引起的该病暴发流行 。1987年辽 规律,对深入认识该鼠疫疫源地很有意义,可为疾病 宁省沈阳市某中学食堂也曾因0:9血清型致病性 防治提供科学依据。 小肠结肠炎耶尔森菌感染引起该病流行。本次在该 参考文献 地区猪粪中检出的0:3血清型,生物3型致病性小 [1]汪华,景怀琦,朱凤才,等.小肠结肠炎耶尔森菌[M].北京:人 肠结肠炎耶尔森菌携带着3种致瘸陛毒力基因,尽管 民卫生出版社,2004:3-25. [2]Wang x,Qiu HY,Jin D,et a1.O:8 serdtype Yersmia 目前在人群中还未发现该菌感染的病例,但应该引起 enterocolica strain in China[J].Internat J Food Micmbiol,2008, 125:259~266. 当地人群,尤其是集体用餐食堂的高度警惕,以防止 [3]景怀琦,李继耀,肖玉春,等.0:3和0:9小肠结肠炎耶尔森菌 被致病眭小肠结肠炎耶尔森菌感染而造成疾病流行。 主要毒力基因分布调查[J].中国媒介生物学及控制杂志, 2004,15(4):317—319. 3-3 绍根地区是以牧为主的地区,近些年布病十分 [4]孙殿斌,靳荣华,庞炜英,等.我国首次发生小肠结肠炎耶氏 菌病暴发流行[J].中国人兽共患病杂志,1987,3(5):2-4. 活跃本次调查结果确定该地区的家畜体内携带小 [5] 肖玉春,梁俊荣,古文鹏,等.不同动物宿主小肠结肠炎耶尔 肠结肠炎耶尔森菌。由于小肠结肠炎耶尔森菌感染 森氏菌分离及结果分析 ].中国人兽共患病学报,2012,28 (5):418-420. 的病例与布病在临床症状上有时很相似(如关节痛 [6] 肖玉春,王鑫,邱海燕,等.中国致病性小肠结肠炎耶尔森菌 等)。为了避免误诊,建议当地医务人员对来自该地 生物分型研究[J].中国人兽共患病学报,2010,26(7):651—653. [7]袁义平,吴银华,王迎庆,等.2011年江苏省东台市小肠结肠 区的相关患者加以辨别以获得更好疗效。 炎耶尔森菌监测分析[J].疾病监测,2012,27(5):406—408. [8]顾玲,汪华,朱凤才,等.江苏省南通地区小肠结肠炎耶尔森 3.4继续深入调查小肠结肠炎耶尔森菌的意义 菌分布特征初步研究[J].中华流行病学杂志,2005,26(1o): 786—789. 阿鲁科尔沁旗绍根地区是历史鼠疫疫区,20世纪60 [9]郭惠,杨晋川,王鑫,等.江苏省徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌 年代以后再未检出过鼠疫菌,但动物鼠疫血清阳性 病原学特征分析[J].中华流行病学杂志,2009,3O(5):525—527. [1O]许静静,杨晋川,王鑫.徐州市2004年小肠结肠炎耶尔森菌人 材料却有间断出现,有时甚至达到我国规定的动物 及动物带菌情况调查报告[J].中国卫生检验杂志,2005,15 鼠疫现疫流行标准。时隐时现的动物间鼠疫疫情迹 (11):1358—1359. 收稿日期:2014—08—29 

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