水产抗氧化肽研究进展

第２９卷第１期　浙江海洋学院学报（自然科学版）　Ｖｏ１．２９　Ｎｏ．１　２０１０年１月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　Ｊａｎ．，２０１０　文章编号：１００８—８３０Ｘ（２０１０）０１—００７４—０７　・综　述・　水产抗氧化肽研究进展　谢宁宁，陈小娥，方旭波，余辉　（浙江海洋学院食品与药学院、医学院，浙江舟山３１６００４）　摘要：从水产副产物中制备天然抗氧化肽替代化学合成抗氧化剂已经越来越引起人们的关注。水产抗氧化肽具有清　除自由基、抑制脂质过氧化等功效，其在医药和食品领域具有广阔的应用潜力　本文综述了水产抗氧化肽的制备及分离方　法、抗氧化能力的评估方法和影响水产抗氧化肽活性的因素几方面的研究，并对其发展前景进行了展望。　关键词：水产；抗氧化肽；自由基；脂质过氧化　中图分类号：Ｒ９３１．７７；Ｒ９７９．１　４９　文献标识码：Ａ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ａｄｖａｎｔａｇｅ　ｏｆ　Ａｑｕａｔｉｃ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ＸＩＥ　Ｎｉｎｇ－ｎｉｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｘｉａｏ－ｅ，ＦＡＮＧ　Ｘｕ－ｂｏ，ｅｔ　ａｌ　ｆＦｏｏｄ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｙ＆Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｏｕｓｈａｎ　３　１　６００４，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｉｎｔｅｒｅｓｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｆｏｏｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｂｙ　ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｈａｓ　ｆｏｃｕｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅｉｒ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ａｑｕａｔｉｃ　ｂｙ－ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ａｑｕａｔｉｃ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｈａｖｅ　ｔｈｅ　ｅｆ－　ｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌｓ，ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ，ｅｔｃ．Ｈｅｎｃｅ　ａｑｕａｔｉｃ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｈａｖｅ　ｗｉｄｅ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｐｏｔｅｎｔｉｌａｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｏｏｄ　ｉｎｄｕｓｔｒｙ　ａｎｄ　ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｔｈｉｓ　ａｒｔｉｃｌｅ　ｒｅｖｉｅｗｓ　ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａ—　ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｓｐｅｃｔ　ｏｆ　ａｑｕａｔｉｃ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｗａｓ　ｆｏｒｅｃａｓｔｅｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｑｕａｔｉｃ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ；ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌｓ；ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ　近年来，抗氧化剂在国内外发展很快，用途也越来越广。１９５６年ＨＡＲＭＡＮｔ　提出了衰老的自由基理论　（ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｔｈｅｏｒｙ　０ｆ　ａｇｉｎｇ）之后，越来越多的人认识到人体内氧化产生的自由基与人的衰老和许多疾病有　关。因此，许多抗氧化剂被用作功能因子开发，应用于保健食品及医药等行业。另外，抗氧化剂能延缓含脂　肪食物的腐败变质，它也被运用于食品保鲜储藏工业。　抗氧化剂的种类很多，其中已经被广泛使用的多为化学合成类抗氧化剂，由于其具有毒、副作用，各国　政府纷纷对其强制规定了ＡＤＩ值，控制其添加量　。１９９１年ＰＲＯＫＯＲＮＹ【　提出，一些抗氧化肽和蛋白水解　产物能降低自动氧化速率和脂肪的过氧化物含量，之后，寻找和制备高活性的蛋白源抗氧化剂，成为新的　收稿日期：２００９—０７—３０　基金项目：浙江省科技厅项Ｉ￣１（２００８Ｃ２２０５２）；浙江省大学生科技推广项目　作者简介：谢宁宁（１９８４一），男，安徽淮南人，硕士研究生，研究方向：海洋生物资源利用．　通讯作者：陈小娥（１９６８一），女，浙江浦江人，副教授，研究方向：海洋生物资源利用．Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｉａｏｅｃｈｅｎ＠１６３．ｃｏｒｎ　第１期　谢宁宁等：水产抗氧化肽研究进展　７５　研究焦点。　在水产品加工工业中，不可避免地产生了许多废弃低值蛋白，采用生物酶工程和发酵工程等手段，它　们可以作为制备抗氧化肽的优良备选原料。同时，开发利用水产副产物中蛋白资源，有利于提高水产品的　经济附加值，降低环境污染。已经有许多研究者从多种水产品中制备出具有抗氧化性的活性肽，本文将针　对这方面的研究与进展进行综述。　１氧化作用的危害及防治　很多证据显示，活性氧（ＲＯＳ）和自由基在许多退行性疾病如癌症、动脉硬化及糖尿病等中起重要作用嘲，　它们的形成是呼吸过程中不可避免的。这些自由基非常地不稳定，它们能迅速地同机体中的其它基团或物　质发生反应，导致细胞或组织的氧化损伤。生物机体依靠多种由酶系（ＳＯＤ、ＧＳＨ—Ｐｘ、ＣＡＴ、ＧＳＴ等１和非酶　系ｆ葡萄糖、维生素、氨基酸类等１物质组成的抗氧化体系，对抗活性氧及自由基。但是，这些防御体系并不　能阻止所有氧化损伤。生物体通过补充含有抗氧化物质的成分，可以有效地减少氧化损伤对机体的危害。　同样，在食品工业中，由于脂质过氧化，导致食品产生异味、发臭和潜在的毒性物质等不良后果，容易造成　不少经济损失ｆｓ）。通过在食品中添加抗氧化剂，可以有效地对抗脂质过氧化，防止食物腐败变质，避免浪　费。　２水产品抗氧化肽的原料　许多研究者对鱼类、甲壳类、软体动物进行了抗氧化活性的研究。ＡＭＡＲＯＷＩＣＺ和ＳＨＡＨＩＤＩ旧通过分　离毛鳞鱼Ｍａｌｌｏｔｕｓ　ｖｉｌｌｏｓｕｓ蛋白水解液，得到一种在ｐ一胡萝卜素一亚油酸模型体系内具有稳定抗氧化活性　的组分。ＳＡＣＨＩＮＤＲＡ和ＢＨＡＳＫＡＲｒ０采用乳酸发酵虾Ｐｅｎａｅｕｓ　ｍｏｎｄｏｎ的废弃物，制得的产物含有低分子　量的蛋白类物质，并且其具有清除多种自由基和促灭单线态氧形成的作用。ＢＩＮＳＡＮ等［Ｂ１以不同比例混合　的去离子水和乙醇为介质，对白虾Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ　ｖａｎｎａｍｅｉ头胸部提取出的抗氧化肽的活性和稳定性进行了　研究。ＱＩＣＡＮ等　肖　蛎　表ｒａｓ　ｏｓＷｅ口ｇｉｇａｓ蛋白，获得一　１　制备水产抗氧化肽选择用酶　瑚　种由１３个氨基酸残基组成的　ｂ・　。　。　。。　。ｎ　ｏｔ　ｐｒｏｔｅｏｌｙｎ。　ｎｚｙｍ。　ｔｏ　ｐｒｅｐａｒｅ　抗氧化肽段。　ａｑｕ　。　ｎｔ　。　ｄａｎ　ｐｅｐ　ｌｃ。。　３水产品抗氧化肽的制备　原　料　选择用酶　３．１制备方法　鲢鱼Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓ　ｍｏｌｉｔｒｉｘ肌肉【　碱性蛋白酶　３．１．１蛋白酶水解法　军曹鱼Ｒａｃｈｙｃｅｎｔｒｏｎ　ｃａｎａｄｕｍ鱼皮［ＨＩ　菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰酶和胰蛋白酶　通过酶水解蛋白制备抗　牛蛙Ｒａｎａ　ｃａｔｅｓｂｅｉａｎａ　Ｓｈａｗ皮Ｉ１２１　碱性蛋白酶　巨型鱿鱼Ｄｏｓｉｄｉｃｕｓ　ｇｉｇａｓ鱼皮『１３】　胰蛋白酶　氧化肽是目前普遍采用的一　巨型鱿鱼肌肉ｎ棚　胰蛋白酶、　一糜蛋白酶　种方法。酶促水解反应具有条　草鱼Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ　ｉｄｅｌｌｕｓ肌肉［１５１　碱性蛋白酶　件温和、易于控制，专一性较・　腔吻鳕Ｊｏｈｎｉｕｓ　ｂｅｌｅｎｇｅｒｉｉ鱼排ｆ峒　胃蛋白酶　强、副反应产物少等优点。目　金枪鱼鱼骨ｆ　胃蛋白酶　前报道中许多水产品抗氧化　牡蛎Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａｇｉｇａｓ肉Ｉ９１　胰蛋白酶、胃蛋白酶和仅一糜蛋白酶　肽的制备就是采用蛋白酶水　黄斑纹够Ｓｅｌａｒｏｉｄｅｓ　ｔｏｌｅｐｉｓ鱼肉『ｌＢ　１风味蛋白酶和碱性蛋白酶　解的方法。其中，由于底物的　不同，制备抗氧化肽所选用的蛋白酶也不同。表１列举了部分研究者制备水产品抗氧化肽所选用的酶。　另外，除采用外源蛋白酶外，有学者利用鱼类含有的内源性蛋白酶，制备出水产抗氧化肽。ＳＡＭＡ—　ＲＡＮＡＹＡＫＡ和ＣＨＡＮｔ　９】利用太平洋鳕鱼Ｍｅｒｌｕｃｃｉｕｓ　ｐｒｏｄｕｃｔｕｓ肉中感染寄生虫Ｋｕｄｏａ　ｐａｎｉｆｏｒｍｉｓ产生的蛋　白酶水解活性，制备鳕鱼肉抗氧化肽，其中Ｅ—ｌｈ　ＦＰＨ组分在亚油酸自氧化体系中的抗氧化活性高于　ＢＨＡ和　一生育酚。ＪＥ等［２０１采用自制的“鲐鱼肠天然酶（ＭＩＣＥ）”水解狭鳕Ｔｈｅｒａｇｒａ　ｃｈａｌｃｏｇｒａｍｍａ鱼排蛋白，　７６　浙江海洋学院学报（自然科学版）　第２９卷　鱼排蛋白水解产物（ＡＰＨ）被分成５种分子量大小不同的组分，其中分子量最小的ＡＰＨ—Ｖ组分具有最高的　抗氧化活性，通过纯化之后的多肽样品浓度为５３．６　ｍｏｌ／Ｌ时，羟自由基清除率为３５％。　３．１．２发酵法　许多水产品经发酵后，在微生物和内源酶的作用下，有机物质转变成了小分子物质如肽类、氨基酸类　和其它含氮化合物。其中的多肽和氨基酸不仅对发酵产物的风味起重要贡献，而且对产品的抗氧化功效起　到贡献作用。发酵法与酶解法相比，能将微生物产酶和酶水解两步合一，省去酶的分离和提纯步骤，减少生　产工序，降低成本。　ＲＡｊｆＡＰＡＫＳＥ等　通过分离纯化紫贻贝Ｍｙｔｉｌｕｓ　ｅｄｕｌｉｓ发酵液，制备出具有重复序列“ＨＦＧＢＰＦＨ”的多　肽，经检测其具有较高的自由基清除能力、Ｆｅ２螫合能力及提高氧化损伤细胞成活率的作用。ＰＥＲＡＬＴＡ等瑚　研究了菲律宾传统食盐发酵的虾Ａｃｅｔｅｓ　ｓｐｐ酱的抗氧化性，结果证明通　抗氯化　粗。　过适当延长发酵时间，在有效地增加自由氨基酸含量的同时，也提高了虾　酱的抗氧化能力。　二ｌ＝＝　。　３．２分离纯化及结构鉴定　组务．Ｔ　组　Ⅱ　…．：　从目前报道的水产品抗氧化肽来看，分子量多集中在１　０００　Ｄａ左右，—————　——一　氨基酸残基的数目一般在２０个以内，而且，在抗氧化肽粗品中，肽的种类　较多，活性肽组分对外界环境条件也比较敏感，因此，分离纯化较困难，通　胬于‘　抉联折　常采用单一的分离纯化手段不能达到理想的分离效果。目前，普遍采用多鲥　Ｆ．　矧‘　Ｅ　…　种分离技术联用的手段。一般的分离纯化流程如图１所示。Ｌ————ｔ———一＿Ｊ　超滤（ｕＦ）是膜分离技术的一种，实践证明膜技术具有耗能低、设备小、　纽智ｘ　操作管理方便和质量好等优点。近年来，超滤技术已经被应用于水产品抗　凝Ｊ目　析　氧化肽的分离纯化。ＭＥＮＤＩＳ等【・３１采用１０　ｋＤａ，５　ｋＤａ和３　ｋＤａ　３种膜截留　．　，　鱿鱼皮明胶水解产物，初步筛选出小于３　ｋＤａ分子量的抗氧化活性最强。‘Ｌ　——二　二＿——＿＿ｊ　组分。　组ｌ夯　离子交换色谱（ＩＥｃ）是多肽分离纯化过程中经常采用的方法，它是以　反桐高效液相色谱　离子交换剂为固定相，根据流动相中组分离子与交换剂上平衡离子进行组　可逆交换时，结合力大小差异而进行分离的一种层析方法。很多的研究者　采用ＳＰ—Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ｃ一２５阳离子交换色谱分离水产品抗氧化活性组分。如　狭鳕Ｔｈｅｒａｇｒａ　ｃｈａｌｃｏｇｒａｍｍａ鱼排　、巨鱿鱼Ｄｏｓｉｄｉｃｕｓ　ｇｉｇａｓ肉【１４】超滤活性　质谱　组分等。　多从序列　凝胶层析（ＧＣ）又称凝胶排阻色谱、分子筛层析和凝胶过滤等，是利用　图１分离纯化流程图　分子大小和形状差异进行分离的一种温和、高效的方法。Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ一２５　Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｌｆｏｗ　ｈａｒｔ　ｏｆ　ｉｓｏｌａｔｉｏ　凝胶柱层析是分离小分子量水产抗氧化肽采用的最多的一种，如乳酸发　ａｎｄ　ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　酵虾Ｐｅｒｍｅｕｓ　ｍｏｎｄｏ凡废弃物ｔＴｌ。另外，有学者采用Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　１　０１３００　ＧＬ凝胶柱纯化牛蛙Ｒａｎ口ｃａｔｅｓｂｅｉａｎａ　Ｓｈａｗ［１　２］皮和草鱼Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ　ＺＺ　【　水解物。　为了获得活性最高的多肽纯化物，通常采用高效液相色谱ｆＨＰＬＣ１法进行分离纯化验证。高效液相色谱　是近年来肽的分离纯化中广泛应用的技术，主要用于１０　ｋＤａ以下的极性小分子肽的分离纯化。ＲＡ—　ＪＡＰＡＫＳＥ等【２１］采用ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　１００—７　Ｃ　１　８　ＨＰＬＣ柱和Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ　Ｃ　１　８　ＨＰＬＣ柱两步分离，制得９６２　Ｄａ的活性　最高抗氧化肽纯品。ＫＩＭ等【　ｑ将离子交换层析后的活性最高组分进一步经ＨＰＬＣ分离，分别采用了１次　Ｃａｐｃｅｌｌ　Ｐａｋ　Ｃ１８ＵＧ一１２０柱和２次Ｓｙｎｃｈｒｏｐａｋ　ＲＰＰ一１００　ＲＰ—ＨＰＬＣ　ａｎａｌｙｔｉｃａｌ柱，制得抗氧化肽纯品。对最　终制得的高纯度抗氧化肽，通常采用质谱（ＣＭ１进行分子量的测定，推测其氨基酸序列。　４水产抗氧化肽活性评估方法　评估水产抗氧化肽的活性，一般采用自由基清除能力、抗脂质自氧化能力、金属离子螯合能力、协同抗　第１期　谢宁宁等：水产抗氧化肽研究进展　氧化能力等多种评价方法进行体外活性实验评估。经筛选出的具有抗氧化活性的物质可通过体内试验进　一步检验评估。　４．１清除自由基　自由基是指一类可以独立存在的含有未配对电子的物质，包括分子、原子、原子团或离子。主要包括超　氧阴离子（Ｏ２＿・）、过氧化氢（Ｈ　Ｏ２）、羟自由基（ＯＨ・）、单线态氧（　Ｏ２）等，这些自由基具有不稳定性和高反应性。　抗氧化剂可以有效地将泄漏出来的、多余的活性氧等清除掉，从而保护细胞、组织免遭氧化损伤。　目前抗氧化肽的自由基清除效果，普遍采用自由基清除率来表示。二苯代苦昧酰肼自由基ｆ１，ｌ—　ｄｉｐｈｅｎｙｌ一２－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ，简称ＤＰＰＨ）是一种较稳定的自由基。当有自由基清除剂存在时，ＤＰＰＨ自由基的　单电子被分配而使其颜色变浅，利用分光光度法可以检测自由基清除情况，从而评价样品抗氧化能力。羟　自由基是化学性质最活泼的活性氧自由基，它带有１个不成对的电子，是对人体毒性最大的自由基，它反　应速度极快，可以与活细胞中的大分子如蛋白和ＤＮＡ发生反应而造成损害ｉ２３１。因此，较多的研究者选用以　上２种自由基的清除率来评估水产蛋白水解产物的抗氧化性。　除此之外，超氧阴离子自由基　、过氧化氢自由基　等的清除率也被一些学者作为综合评价水产多肽　抗氧化能力的选择方法。　４．２抑制脂质自氧化　脂类的自氧化是造成食品质量下降最主要的化学因素之一。尤其是富含不饱和脂肪酸的食品，很容易　氧化生成过氧化脂质，再经过分解、聚合等反应产生腐败直至出现毒性。另一方面，在生物体内，癌症的发　生以及衰老也都与体内脂肪的氧化有关。因此，脂类常作为被氧化的底物用来检测样品的抗氧化能力。　水产抗氧化肽抑制脂质自氧化的效果，一般采用以亚油酸为氧化底物的亚油酸模型系统。亚油酸通过　吸收空气中的氧进行自动氧化反应，产生脂肪酸氢过氧化物。水产抗氧化肽的添加，可以抑制自氧化反应。　通过比较两种情况下的氢过氧化物的含量，来评估抑制脂类自氧化的效果。很多报道均采用硫氰酸铁法１２６１　检测氢过氧化物的含量。该法的原理是亚铁离子可被氢过氧化物氧化成高铁离子，其反应为Ｆｅ２＋＋２Ｈ＋＋Ｏ　Ｆｅ　Ｈ２０，然后加入硫氰酸铵与Ｆｅ　形成红色的络合物，其在５４０　ｎｍ处有强吸收值，通过比色即可测出氢　过氧化物的含量。　４－３金属离子螯合能力　过渡态金属离子如Ｆｅ２￣和Ｃｕ２＋台色催化不饱和脂质氧化过程中自由基的形成　，而水解产生的多肽的羧　酸基团和氨基基团具有金属离子螯合能力，因此，能够削弱脂质的氧化。由于水解过程中多肽的断裂，导致　了肽片段浓度的增加，从而有助于清除羟自由基中的金属离子，产生抗氧化性。　ＤＯＮＧ等【　０】研究了鲢鱼蛋白水解物的金属离子螯合活性。随着水解时间的增加，水解产物的螯合活性　增强。其中，在任何时间段时，碱性蛋白酶的水解产物的活性均比风味蛋白酶高。经碱性蛋白酶水解６　ｈ的　水解物的金属离子螯合活性最高，达９２．９７％。并且螯合活性和水解度（Ｄｍ之间存在线性关系。结果证明低　分子量的水解产物具有较高的金属离子螯合活性。　４．４协同抗氧化性　在水产品水解物中也有协同抗氧化活性肽的报道。这类抗氧化肽本身的抗氧化能力比较低，但是在与　其它一些抗氧化剂同时使用时，具有很强的抗氧化效果。ＪＥ等　研究了狭鳕鱼排的水解产物，经超滤膜过　滤后的５种组分中，仅ＡＰＨ—Ｉ无协同抗氧化性，其它组分在亚油酸模型系统中均具有同仅一生育酚的协同　抗氧化性。　４．５细胞损伤模型　最近几年，越来越多的研究者采用细胞损伤模型评估抗氧化活性。氧化作用在细胞的损伤死亡中扮演　重要角色，通过添加抗氧化剂对抗细胞中产生的氧化作用，能够提高细胞的成活率。ＭＥＮＤＩＳ等【ｌ３】通过建　立人工培养的人类肺脏纤维细胞模型，采用ＭＴＹ法，检测ｔ－ＢＨＰ介导的氧化损伤细胞的成活率，结果显　示，在与天然抗氧化剂ｄ一生育酚相比时，鱿鱼皮明胶多肽能显著提高细胞成活率。　４．６体内实验　７８　浙江海洋学院学报（自然科学版）　第２９卷　通过体内实验验证样品的抗氧化性，是活性评估中最重要的一环。通常将受试物连续饲喂大鼠或小鼠　１—３月，然后处死，测定其血或组织ｆ如肝、脑１中ＭＤＡ、单胺氧化酶（ＭＡＯ—Ｂ）ｌｆ￣抗氧化酶ＳＯＤ、谷胱甘肽过　氧化物酶（ＧＳＨ—Ｐｘ）及过氧化氢酶（ＣＡＴ），同对照组比较，若ＭＤＶ、ＭＡＯ—Ｂ降低，ＳＯＤ、ＧＳＨ—Ｐｘ、ＣＡＴ等升　高，则说明受试物具有抗氧化能力。　林琳和李八方　研究了具有清除自由基作用的鱿鱼多肽的体内抗氧化活性。采用Ｄ一半乳糖致衰的小　鼠模型，结果表明分子量小于２　ｋＤａ的多肽组分，能够提高小鼠血液及皮肤中ＳＯＤ和ＧＳＨ—Ｐｘ的活力，降　低ＭＤＡ含量，并提高小鼠皮肤中Ｈｙｐ的含量。　５影响水产抗氧化肽活性的因素　５．１水解过程因素　通过水解制备出的抗氧化肽的活性与底物原料、酶的种类、酶解温度、酶解时间、酶的加入量、ＤＨ、以　及酶解产物的水解度　）等许多因素有关。　ＫＬＯＭＰＯＮＧ等【　睬用碱性蛋白酶和风味蛋白酶水解黄斑纹够鱼蛋白制得２种水解产物分别为ＨＡ和　ＨＦ。采用不同的酶，活性宜有变化。当水解度增加时，ＨＡ的ＤＰＰＨ自由基清除活性和还原能力增强，ＨＦ并　无此现象。ＨＡ和ＨＦ的金属离子螯合能力均随着水解度的增加而增强。并且，在相同的水解度时，ＨＦ的金　属离子螯合能力通常比ＨＡ高。在低水解度（删＝５％）时，ＨＡ的ＤＰＰＨ自由基清除活性较好，同时，在高的　水解度　日＝２５％１时，ＨＦ的还原能力较好。也有研究者研究了碱性蛋白酶处理的鲢鱼蛋白水解产物，羟自　由基清除活性和亚油酸过氧化抑制率分别在水解时间为１．５表２水产抗氧化肽的序列结构及分子量　ｈ和２．０　ｈ时达到最大值，证明鲢鱼水解蛋白抗氧化能力是　。　．．　。　．　与水解度和水解时间相关［１ｏ１。　．　．　．．　：．．，．　．．，　５．２肽的化学结构　‘　抗氧化肽的功能特性较多地受分子结构和分子量的影　响　。ＭＵＲＡＳＥ等【３　认为，抗氧化肽的疏水性增强了它的抗　氧化性和乳化效果，并且，这类多肽在同非肽类抗氧化剂协　同时具有比较强的协同效果。ＣＨＥＮ等　以为组氨酸含量较　高的多肽，具有金属离子螯合作用。另外，一些其它的氨基　酸，比如，组氨酸、脯氨酸、丙氨酸和亮氨酸，被报道对自由基　清除有贡献作用［３３１。ＳＵＥＴＳＵＮＡ等　报道了亮氨酸出现在Ｃ　端具有抗氧化性，并认为在多肽结构中芳香族氨基酸的酚羟　基基团能够作为有效的电子供体。ＭＥＮＤＩＳＡ等ｆ１３报道了鱿鱼皮明胶抗氧化肽Ｐ１和Ｐ２的抗氧化性来源于　序列中富含间隔的“亲水一疏水”序列，同时，由于分子量较低，Ｐｌ比Ｐ２具有更高的抗氧化特性。表２为部　分水产抗氧化肽的序列结构及分子量。　另外，除以上两方面外，抗氧化肽所处的ＤＨ、温度等外界条件同样影响活性的发挥。ＢＩＳＡＮ等【啊ｆ究　表明，白虾抗氧化肽，在ｐＨ　２－１１，温度为２５～１００℃范围内，ＦＡＲＰ、ＴＢＡＲＳ和ＤＰＰＨ　３种活性仍然高于　８０％。活性肽在１００℃加热３０　ｍｉｎ时，３种活性稍微降低，３０～１２０　ｍｉｎ时，３种活性维持在８０％左右，１２０～　１５０　ｍｉｎ时，ＤＰＰＨ活性稍微降低。　６水产抗氧化肽研究展望　我国是水产品加工大国，每年都会产生大量的低值水产品下脚料蛋白资源，开发利用水产抗氧化肽将　具有不菲的经济效益和社会意义。水产抗氧化肽能有效地清除体内的活性氧自由基，保护细胞和线粒体的　正常结构和功能，同时防止食品脂质过氧化变质，在医药和食品领域具有广泛的应用前景。但水产抗氧化　肽的研究中仍有不少问题需要解决。第一、有关抗氧化能力的测定方法很多，但是通用的方法很少，使得各　种实验缺乏可比性，需统一抗氧化能力测定标准；第二、水产抗氧化肽单一组分和不同组分协同作用的机　第１期　谢宁宁等：水产抗氧化肽研究进展　制等还有待深入研究；第三、有关水产抗氧化肽的活性研究大多缺乏临床试验，体内抗氧化机理还需要进　一步深入研究；第四、对于水产抗氧化肽在浓缩干燥过程中的活性损失，还缺乏系统性的深入研究；第五、　在抗氧化肽分离纯化的研究中，盐的存在一定程度上会影响抗氧化活性的测定，但是脱盐问题一直没能得　到很好的解决；第六、目前的分离纯化手段很难纯化得到分子量很小、由２　３个氨基酸组成的肽段，这也　是大多数研究报道所得到的抗氧化肽分子量都大于５００　Ｄａ的原因之一。　参考文献：　【１】ＨＡＲＭＡＮ　Ｄ．Ａｇｉｎｇ：ａ　ｔｈｅｏｒｙ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ａｎｄ　ｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ，１９５６，１　１（３）：２９８－３００．　【２】ＧＢ　２７６０—１９９６食品添加剂使用卫生标准［ｓ】．　［３】ＰＲＯＫ０ＲＮＹ　Ｊ．Ｎａｔｕｒｌａ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｆｏｒ　ｆｏｏｄ　ｕｓｅ［］Ｊ．Ｔｒｅｎｄｓ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉ　Ｔｅｃｈｎｏｌ，１９９１，２（９）：２２３－２２７．　［４］ＢＥＣＫＭＡＮ　Ｋ　Ｂ，ＡＭＥＳ　Ｂ　Ｎ．Ｔｈｅ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｈｔｅｏｒｙ　ｏｆ　ａｇｉｎｇ　ｍａｔｕｒｅｓ［］Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ，１９９８，７８（２）：５４７－５８１．　［５】ＭＡＩＬＬＡＲＤ　Ｍ　Ｎ，ＳＯＵＭ　Ｍ　Ｈ，ＢＯＩＶＩＮ　Ｐ，ｅｔ　１ａ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｂａｄｅｙ　ａｎｄ　ｍａｌｔ：Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｗｉｔｈ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏｎｔｅｎｔ［Ｊ］．　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９６，２９（３）：２３８－２４４．　［６】ＡＭＡＲＯＷＩＣＺ　Ｒ　ＳＨＡＨＩＤＩ　Ｆ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｒｆａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｃａｐｅｌｉｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ叨．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｉ９９７，　５８（４）：３５５—３５９．　［７】ＳＡＣＨＩＮＤＲＡ　Ｎ　Ｍ，ＢＨＡＳＫＡＲ　Ｎ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｌｉｑｕｏｒ　ｆｒｏｍ　ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ　ｓｈｒｉｍｐ　ｂｉｏｗａｓｔｅ叨．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒ　Ｔｅｃｈｎｏｌ，　２００８，９９（１８）：９　０１３－９　０１６．　【８】ＢＩＮＳＡＮ　Ｗ，ＢＥＮＪＡＫＵＬ　Ｓ，ＶＩＳＥＳＳＡＮＧＵＡＮ　Ｗ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｍｕｎｇｏｎｇ，ａｎ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｐａｓｔｅ，ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｅｅｐｈａｌｏｔｈｏｒａｘ　ｏｆ　ｗｈｉｔｅ　ｓｈｒｉｍｐ（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ”口ｎ，ｍｌｅ０［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，１０６（１）：１８５－１９３．　［９］ＱＩＡＮ　Ｚ　Ｊ，ＪＵＮＧ　Ｗ　Ｋ　ＢＹＵＮ　Ｈ　Ｇ，ｅｔ　１ａ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｎａ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｐｕｒｉｉｆｅｄ　ｆｒｏｍ　ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｉｔｎａｌ　ｄｉｇｅｓｔｓ　ｏｆ　ｏｙｓｔｅｒ，Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ＃ｇａｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ［］Ｊ．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｅｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，９９（９）：３　３６５－３　３７１．　【１０］ＤＯＮＧ　Ｓ　Ｙ，ＺＥＮＧ　Ｍ　Ｙ，ＷＡＮＧ　Ｄ　Ｆ，ｅｔ　１ａ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｓｉｌ－　ｖｅｒ　ｃａｒｐ（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓ　ｍｏｌｉｔｒｉｘ）【Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓ￣，２００８，１０７（４）：１　４８５－１　４９３．　【ｌ１】ＹＡＮＧ　Ｊ　Ｌ＇ＨＯ　Ｈ　Ｙ，ＣＨＵ　Ｙ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｒｔｏｒｔｄｅ　ｇｅｌａｔｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ｅｏｂｉａ　（Ｒ￣ｈｙｃｅ，ａｒｏｎ　ｃａｎａｄｕｍ）ｓｋｉｎ［］Ｊ．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，１　１０（１）：１２８－１３６．　【１２］ＱＩＡＮ　Ｚ　Ｊ，ＪＵＮＧ　Ｗ　Ｋ　ＫＩＭ　Ｓ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｆｒｏｍ　ｈｙ－　ｄｒｏｌｙｓａｔｅ　ｏｆ　ｂｕｌｌｆｒｏｇ　ｓｋｉｎ，Ｒａｎａ　ｃａｔｅｓｂｅｉａｎａ　Ｓｈａｗ［］Ｊ．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，９９（６）：１　６９０－１　６９８．　【１３】ＭＥＮＤＩＳ　Ｅ，ＲＡＪＡＰＡＫＳＥ　Ｎ，ＢＹＵＮ　Ｈ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｊｕｍｂｏ　ｓｑｕｉｄ（Ｄｏｓｉｄｉｃｕｓ＃ｇａｓ）ｓｋｉｎ　ｇｅｌａｔｉｎ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅｉｒ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｅｆｆｅｃｔｓ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００５，７７（１７）：２　１６６－２　１７８．　【１４１　ＲＡＪＡＰＡＫＳＥ　Ｎ，ＭＥＮＤＩＳ　Ｅ，ＢＹＵＮ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｇｉａｎｔ　ｓｑｕｉｄ　ｍｕｓｃｌｅ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｏｎ　ｌｆｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｏｘｉｄａｉｔｖｅ　ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｕｔｒｉｉｔｏｎａｌ　Ｂｉｃｏｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，ｌ６（９）：５６２—５６９．　【１５】ＲＥＮ　Ｊ　Ｙ，ＺＨＡＯ　Ｍ　Ｍ，ＳＨＩ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　ｇｒａｓｓ　ｃａｒｐ　ｍｕｓｃｌｅ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　ｂｙ　ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ａｎｄ　ｅｌｅｃｔｒｏ　ｓｐｒａｙ　ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ－ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［］ｊ．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，１０８（２）：７２７－７３６．　【１６】ＫＩＭ　Ｓ，ＪＥ　Ｊ，ＫＩＭ　Ｓ．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒｏｍ　ｈｏｋｉ（Ｊｏｈｎｉｕｓ　ｂｅｌｅｎｇｅｒｉｉ）ｆｌａｍｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂｙ　ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ［］ｊ．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｕｔｒｉｉｔｏｎａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６，１８（１）：３１－３８．　【１７】ＪＥ　Ｙ　Ｊ，ＱＩＡＮＺ　Ｊ，ＢＹＵＮ　Ｈ　Ｇ’ｅｔ　１ａ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｕｎａ　ｂａｃｋｂｏｎｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂｙ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ［］Ｊ．Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，４２（５）：８４０—８４６．　［１　８】ＫＬＯＭＰＯＮＧ　Ｖ，ＢＥＮＪＡＫＵＬ　Ｓ，ＫＡＮＴＡＣＨＯＴＥ　Ｄ，ｅｔ　１ａ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ　ｏｆ　ｙｅｌｌｏｗ　ｓｔｒｉｐｅ　ｔｒｅｖａｌｌｙ（Ｓｅｌａｒｏｉｄｅｓ　ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ）ａｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ　ｂｙ　ｈｔｅ　ｄｅｇｒｅｅ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｅｎｚｙｍｅ　ｔｙｐｅ叨．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　２００７，１０２（４）：１　３１７－１　３２７．　［１９】ＳＡＭＡＲＡＮＡＹＡＫＡＡ　Ａ　Ｇ　Ｐ，ＣＨＡＮ　Ｅ　Ｃ　Ｙ　Ｌ　Ａｕｔｏｌｙｓｉｓ—ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｆｓｈ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　ｗｉｈｔ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｒｏｐ—　ｅｒｔｉｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｐａｃｉｉｆｃ　ｈａｋｅ（Ｍｅｒｌｕｃｃｉｕｓ　ｐｒｏｄｕｃｔｕｓ）［］Ｊ．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，１０７（２）：７６８－７７６．　［２Ｏ】ＪＥ　Ｊ　Ｙ，ＰＡＲＫ　Ｐ　Ｊ，ＫＩＭ　Ｓ　Ｋ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ａｌａｓｋａ　Ｐｏｌｌａｃｋ（Ｔｈｅｒａｇｒａ　ｃｈａｌｃｏｇｒａｍｒｎａ）ｆｌａｍｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２００５，３８（１）：４５—５０．　【２１］ＲＡＪＡＰＡＫＳＥ　Ｎ，ＭＥＮＤＩＳ　Ｅ，ＪＵＮＧ　Ｗ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒｏｍ　ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ　ｍｕｓ￣ｌ　ｓａｕｃｅ　ａｎｄ　ｉｓｔ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｒｏｐｅ￣ｅｓ［］ｊ．Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２００５，３８（２）：１　７５－１　８２．　［２２Ｊ　ＰＥＲＡＬＴＥ　Ｅ　Ｍ，ＨＡＴＡＴＥ　Ｈ，ＫＡＷＡＢＥ　Ｄ，ｅｔ　１ａ．Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｎｕｔｒｉｉｔｏｎａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅ　ｓａｌｔ—　ｆｅｍｒｅｎｔｅｄ　ｓｈｒｉｍｐ　ｐａｓｔｅ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ［］ｊ．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，ｌ１　１（１）：７２－７７．　［２３】ＣＡＣＣＩＵＴＩ＇ＯＬＯ　Ｍ　Ａ，ＴＲＩＮＨ　Ｌ，ＬＵＭＰＫＩＮ　Ｊ　Ａ，ｅｔ　１ａ．Ｈｙｐｅｒｏｘｉａ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎ　ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｃｅｌｓ［１３．Ｆｒｅｅ　Ｒａｄｉｃ　浙江海洋学院学报（自然科学版）　第２９卷　ＢｉｏＪ　Ｍｅｄ，１９９３，１４（３）：２６７—２７６．　【２４】ＧＵＯ　Ｑ，ＺＨＡＯ　Ｂ，ＳＨＥＮ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．ＥＳＲ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ—ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　ｔｅａ　ｃａｔｅ　ｃｈｉｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｅｐｉｍｅｒｓ［Ｊ］．Ｂｉｃｏｈｉｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ（ＢＢＡ）－Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｓｕｂｊｅｃｔｓ，１９９９，１　４２７（１）：１　３—２３．　【２５】ＨＩＲＡＭＯＴＯ　Ｋ，ＪＯＨＫＯＨ　Ｈ，ＳＡＫＯ　Ｋ　Ｉ，ｅｔ　１ａ．ＤＮＡ　ｂｒｅａｋｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃａｒｂｏｎ—ｃｅｎｔｅｒｅｄ　ｒａｄｉｃａｌ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　２，２一ａｚｏ—　ｂｉｓ一（２一ａｍｉｄｉｎｏｐｒｏｐａｎｅ）一ｈｙｄｍｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＡＡＰＨ）［Ｊ】．Ｆｒｅｅ　Ｒａｄｉｃ　Ｒｅｓ，１９９３，１９（５）：３２３—３３２．　【２６】ＯＳＡＷＡ　Ｔ，ＮＡＭＩＫＩ　Ｍ．Ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ　ｌｅａｆ　ｗａｘｅｓ　．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　１９８５，３３（３）：７７７－７８０．　［２７】ＳＴＯＨＳ　Ｓ　Ｊ，ＢＡＧＥＨＩ　Ｄ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｍｅｔａｌ　ｉｏｎｓ【Ｊ］．Ｆｒｅｅ　Ｒａｄｉｃａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９５，１８　（２）：３２１－３３６．　［２８】林琳，李八方．鱿鱼皮胶原蛋白水解肽抗氧化活性研究【Ｊ］．中国海洋药物杂志，２００６，２５（４）：４８—５１．　［２９】ＪＥＯＮ　Ｙ　Ｊ，ＢＹＵＮ　Ｈ　Ｇ，ＫＩＭ　Ｓ　Ｋ．Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｆｕｎｃｉｔｏｎａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｃｏｄ　ｆｒａｍｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　ｕｓｉｎｇ　ｌｕｔｒａ　ｉｆｌｒｔａｉｔｏｎ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ［￣ｊ．Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９９，３５（５）：４７１－４７８．　［３ｏ】ＳＵＥＴＳＵＮＡ　Ｋ，ＵＫＥＤＡ　Ｈ，ＯＣＨＩ　Ｈ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｉｔｅｓ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃａｓｅｉｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｕｔｒｉｉｔｏｎａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，１　１（３）：１２８－１３１．　【３１】ＭＵＲＡＳＥ　Ｈ，ＮＡＧＡＯ　Ａ，ＴＥＲＡＯ　Ｊ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｍ　ａｎｄ　ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｎ—Ｏｏｎｇ—ｃｈａｉｎ—ａｃｙ１）ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ　ａｎｄ　Ｎ一（１ｏｎｇｃｈａｉｎ—　ａｃｙ１）ｃａｒｍｎｏｓｉｎｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ｎａｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３，４１（３）：１　６０１—１　６０４．　［３２】ＣＨＥＮ　Ｈ　Ｍ，ＭＵＲＡＭＯＴＯ　Ｋ，ＹＡＭＡＵＣＨＩ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｆ０ｕｎｄ　ｉｎ　ｈｔｅ　ｄｉｇｅｓｔｓ　ｏｆ　ａ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｌａ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，４６（１）：４９－５３．　［３３】ＫＩＭ　Ｓ　Ｋ，ＫＩＭ　Ｙ　Ｔ，ＢＹＵＮ　Ｈ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　ｇｅｌａｔｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ　ｏｆ　Ａｌａｓｋａ　Ｐｏｌｌａｃｋ　ｓｋｉｎ［］ｊ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，４９（４）：１　９８４—１　９８９．　（上接第４８页）　［２］ＧＯＲＤＡＮ　Ｍ　Ｈ．Ｄｉｅｔａｒｙ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｉｎ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ［］ｊ．Ｎａｔｕｒｌａ　Ｐｒｏｄｕｃｔ　Ｒｅｐｏｒｔｓ，１９９６，１３（４）：２６５—２７３．　［３纪明侯．海藻化学【３］Ｍ】．北京：科学出版社，１９９７．　［４］ＷＡＮＧ　Ｂｉｎ－ｇｕｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉ－ｗｅｉ，ＤＵＡＮ　Ｘｉａｏ－ｊｎａｎ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｉｔｅｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｎｄ　ｓｅｍｉ—ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｆｒａｅ—　ｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｈｔｅ　ｍａｒｉｎｅ　ｒｄｅ　ａｌｇａ，Ｒｈｏｄｏｍｅ／ａ　ｃｏｎｆｅｒｖｏｉｄｅｓ（Ｒｈｏｄｏｍｅｌａｃｅａｅ）［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ，２００９，１　１３（４）：１　１０１—１　１０５．　【５】ＤＵＡＮ　Ｘ　Ｊ，ＺＨＡＮＧ　Ｗ　Ｗ，ＬＩ　Ｘ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｒｏｐｅｒｔｙ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｎｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ａ　ｒｅｄ　ａｌｇａ，　Ｐ０ｔｙ，ｉＰＪＩｏ，血眦ｅ０　口［Ｊ】．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６，９５（１）：３７－４３．　【６］ＣＨＡＮＤＩＮＩ　Ｓ　ｌ（＇ＧＡＮＥＳＡＮ　Ｐ，ＢＨＡＳＫＡＲ　Ｎ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｉｔｅｓ　ｏｆ　ｈｔｒｅｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｂｒｏｗｎ　ｓｅａｗｅｅｄｓ　ｏｆ　Ｉｎｄｉａ【Ｊ】．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，１０７（２）：７０７—７１３．　［７］张全斌，于鹏展，周革非，等．海带褐藻多糖硫酸酯的抗氧化活性研究【Ｊ］．中草药，２００３，３４（９）：８２４—８２６．　［８】赵雪，薛长湖，王静凤，等．海带岩藻聚糖硫酸酯低聚糖对小鼠肝损伤的保护作用［Ｊ］．中草药，２００３，２５（３）：２８６－２８９．　［９］梁桂宁，谢露，胡世凤，等．海带多糖对应激小鼠肾组织抗氧化能力的影响【Ｊ］．现代医药卫生，２００６，２２（１８）：２　７８３－２　９８４．　［１　ｏ］朱海波，王长海，郑秋生．海带多糖对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用【Ｊ】．烟台大学学报：自然科学与工程版，２００８，２１　（３）：２０４—２０８．　【１１】李兆杰，薛长湖，陈磊，等．低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯的清除活性氧自由基和体内抗氧化作用【Ｊ］．水产学报，２００１，　２５（１）：６４—６８．　［１２１　ＶＥＬＩＯＧＬＵ　Ｙ　Ｓ，ＭＡＺＺＡ　Ｇ，ＧＡＯ　Ｌ＇ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃｓ　ｉｎ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｕｉｔｓ，ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ，ａｎｄ　ｓｒ￣ｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，４６：４　１　１３＿４　１　１７．　【１３】张尊昕，杨伯伦，刘谦光，等．野葛根异黄酮成分的超声萃取及抗氧化作用【Ｊ】．食品科学，２００２，２３（５）：３１—３３．　【１４】金鸣，蔡亚欣，李金荣，等．邻二氮菲一Ｆｅ“氧化法检测Ｈ：ＯＪＦｅ２￣产生的羟自由基【Ｊ］．生物化学与生物物理进展，１９９６，２３　（６）：５５３－５５６．　【１５】ＤＯＲＭＡＮ　Ｈ　Ｊ　Ｄ，ＫＯＳＡＲ　Ｍ，ＫＡＨＬＯＳ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｍｅｎ—　ｈｔａｓｐｅｃｉｅｓ，ｈｙｂｒｉｄｓ，ｖａｒｉｅｔｉｅｓ，ａｎｄ　ｃｕｌｔｉｖａｒｓ叨．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ，２００３，５　１：４　５６３－４　５６９．　【１６】徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学【Ｍ】．北京：人民卫生出版社，１９９１：５０２—５０４．